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TRIZOL提取RNA的詳細步驟,助力科研!
點擊次數:290 更新時間:2023-10-19

Trizol法提取總RNA的原理

Trizol試劑的主要成分是ben酚。ben酚的主要作用是對細胞進行裂解,從而使細胞當中的蛋白質以及核酸物質解聚而得以釋放。苯ben酚雖然可以有效的使蛋白質變性,但它不能wan全抑制RNA酶的活性,因此Trizol中還加入了8-羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase(即RNA酶)。

Trizol試劑不但可用于小量樣品(組織:50-100mg;細胞:5×106),也可用于大量樣品(組織≥1g或細胞≥107),對動物、植物、細菌、血液提取都適用,可同時處理大量不同樣品。反應迅速,提取的總RNA沒有DNA和蛋白質污染,可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護分析等。

TRIZOL提取RNA的詳細步驟

1、在提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5-10

╳106個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞。

2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘;在EP管中,按照每1ml

TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘。

3、取上層水相置于新EP管中,按照每1ml

TRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘。

4、按照每1ml

TRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,棄上清;讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。

Ps:在收集到生物材料之后,最好馬上進行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。



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