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凝膠層析分離物質的優缺點分析
點擊次數:496 更新時間:2023-06-27

??凝膠層析分離物質的優缺點

??1.凝膠層析操作簡便,所需設備簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質—凝膠wan全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。

??2.分離效果較好,重復性高。最tu出的是樣品回收率高,接近100%。

??3.分離條件緩和。凝膠骨架親水,分離過程又不涉及化學鍵的變化,所以對分離物的活性沒有不良影響。

??4.應用廣泛。適用于各種生化物質,如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量范圍也很寬,如SephadexG類為102~105d;Sepharose類為105~108d。

??5.分辨率不高,分離操作較慢。由于凝膠層析是以物質分子量的不同作為分離依據的,分子量的差異僅表現在流速的差異上,所以分離時流速必須嚴格把握。因而分離操作一般較慢。而且對于分子量相差不多的物質難以達到很好的分離。此外,凝膠層析要求樣品粘度不宜太高。凝膠顆粒有時還有非特異吸附現象。

??凝膠層析的應用

??⑴脫鹽:高分子(如蛋白質、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質,可以用凝膠層析法除去,這一操作稱為脫鹽。本法脫鹽操作簡便、快速、蛋白質和酶類等在脫鹽過程中不易變性。適用的凝膠為SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6.柱長與直徑之比為5-15,樣品體積可達柱床體積的25%-30%,為了防止蛋白質脫鹽后溶解度降低會形成沉淀吸附于柱上,一般用醋酸銨等揮發性鹽類緩沖液使層析柱平衡,然后加入樣品,再用同樣緩沖液洗脫,收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發性鹽類。

??⑵用于分離提純:凝膠層析法已廣泛用于酶、蛋白質、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質的分離提純。凝膠對熱原有較強的吸附力,可用來去除無離子水中的致熱原制備注射用水。

??⑶測定高分子物質的分子量:用一系列已知分子量的標準品放入同一凝膠柱內,在同一條件下層析,記錄每一分鐘成分的洗脫體積,并以洗脫體積對分子量的對數作圖,在一定分子量范圍內可得一直線,即分子量的標準曲線。測定未知物質的分子量時,可將此樣品加在測定了標準曲線的凝膠柱內洗脫后,根據物質的洗脫體積,在標準曲線上查出它的的分子量。

??⑷高分子溶液的濃縮:通常將SephadexG-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中,這時水分和低分子量的物質就會進入凝膠粒子內部的孔隙中,而高分子物質則排阻在凝膠顆粒之外,再經離心或過濾,將溶脹的凝膠分離出去,就得到了濃縮的高分子溶液。


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