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關(guān)于常見細(xì)胞裂解液及其組分介紹
點擊次數(shù):528 更新時間:2023-06-09

在許多細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)、純化及蛋白-蛋白互作等免疫實驗(如WB、IP、Co-IP、ChIP)中,細(xì)胞裂解是關(guān)鍵一步。


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基本介紹
根據(jù)不同細(xì)胞類型、蛋白定位及下游應(yīng)用,需要不同的細(xì)胞裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解及蛋白提取(表1)。

表1 根據(jù)不同蛋白定位選擇裂解液

蛋白定位     裂解液
全細(xì)胞     NP-40、RIPA
細(xì)胞質(zhì)(可溶性蛋白)     Tris-HCl
細(xì)胞質(zhì)(細(xì)胞骨架等不溶性蛋白)     Tris-Triton
細(xì)胞膜     NP-40、RIPA
細(xì)胞核     RIPA
線粒體     RIPA
差異化比較

RIPA裂解液

RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,獲得的蛋白樣品可用于常規(guī)WB、IP等實驗。

組分:25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)。

IP裂解液

IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液,具中等強度效力,可高效溶解細(xì)胞蛋白,但不會像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復(fù)合物。適合下游免疫沉淀或親和吸附應(yīng)用。

組分:25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。

NP-40裂解液

NP-40裂解液是一種很溫和的非離子型去垢劑,與蛋白結(jié)合力強,尤其適用于膜蛋白非變性條件下的溶解。

組分:50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化鈉、1%NP-40;加蛋白酶抑制劑:yi肽酶、亮肽素、胃抑素,每種1μg / ml;使用前立即添加1mM PMSF。

Tris-Triton裂解液


Tris-Triton裂解液是非離子型表面活性劑,效力介于NP-40和SDS之間,下游應(yīng)用有WB、ELISA、IP。

組分:10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris),pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧膽酸鈉。

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