要做好一張血涂片,我們應該把它的原理,各種要求和影響因素熟記于心,還要加上適當的練習。
血涂片的制作
一、原理:將一小滴血液均勻涂在玻片上,呈單層分布,制成薄血片。用瑞氏染液進行染色。
二、載波片的要求:制備血涂片使用的載玻片要有很好的清潔度。新的載玻片常有游離堿質,應用清洗液或10% 鹽酸浸泡24小時,然后再徹di清洗。用過的載玻片可放入適量肥皂水或洗滌劑的水中煮沸20分鐘,再用熱水將肥皂和血膜洗去,用自來水反復沖洗,然后擦干備用。
三、操作:
1、用毛細吸管吸取EDTA抗凝的外周血5-7UL,或者直接采集患者末梢血,將血滴滴至載玻片的一端約1CM處或整片的3/4端。有磨砂片的玻片,可在接近磨砂頭的部位來水反復沖洗,然后擦干備用。
2、左手持載玻片,右手持玻片,將推片接近血滴處,然后輕輕接觸血滴并壓在血滴上,使血液呈“ ̄"字型展開,充滿推片寬度。
3、將推片與載玻片形成30度夾角,用均勻的速度將血向載玻片的另一端推動。紅細胞壓積發生變化時,應適當的調整推片與載玻片的角度以及推動血液是的速度。標準的血涂片應做到頭、體、尾分明,兩邊和兩端留有空隙。
四、方法學評價:良好的血涂片是染色后血液形態學檢查的前提。薄血膜推片法用血量少、操作簡單,是應用最guang泛的方法。某些抗凝劑可使血細胞形態發生變化,分類時應注意鑒別。根據不同的需要(如瘧原蟲)可采用厚血涂片法,陽性檢出率高。
血涂片染色
1.瑞氏-吉姆薩混合染色能集合瑞氏染色與吉姆薩染色的優點。
2.染色方法:標記血涂片,將血涂片平放在染色架上,滴加A液覆蓋整個血膜,30秒-1分鐘后,滴加B液,將A、B液混勻,可用洗耳球輕吹液面,A、B液的比例為1:2,靜置水平位置染色5-10分鐘后,將載玻片拿起,輕輕晃動,使染料不再附著于血膜上。把水流調至最小,平持載玻片,與水流方向呈90度,在血膜頭部沖入,向血膜的尾端調整玻片的角度,直至染料沖干凈,沖洗干凈后的血涂片,放置在血片架上將水自然控干,或傾斜玻片等待自然干燥。
3.判斷染色結果:在正常情況下,良好的染色結果為血膜外觀為淡紫紅色;低倍鏡下,細胞分布均勻;細胞呈粉紅色,少見染色顆粒,白細胞胞質能顯示各類細胞的te有色彩,白細胞核染成紫紅色。