菌種保藏的方法很多,但原理大同小異。首先要挑選優(yōu)良純種。利用微生物的孢子、芽孢及營養(yǎng)體;其次,根據其生理、生化性,人為創(chuàng)造低溫、干燥或缺氧等條件,抑制微生物的代謝作用,使其生命活動降低到極低的程度或處于休眠狀態(tài),從而延長菌種生命以及使菌種保持原有的形狀,防止變異。不管采用哪種保藏方法,在菌種保存過程中要求不死亡、不污染雜菌和不退化。
短期:斜面保藏
斜面保藏是目前最pu遍的短期保藏法,操作簡單,使用方便,但需定期接種。因此工作量較大,而且傳代次數(shù)多易發(fā)生變異,因此,僅適用于短期經常使用的菌種。
1. 配制培養(yǎng)基,營養(yǎng)成分濃度稍低為宜,特別是糖類盡可能降低,產酸菌種,則應添加少量碳酸鈣;
2. 斜面裝液量,斜面以傾斜后不超過試管長度 1/2 為宜;
3. 斜面培養(yǎng),溫度較最適稍低,時間較最適略長;
4. 生長完成后,密封置于 2~8℃的冰箱中保藏。每傳代一次,霉菌、放線菌及有芽孢的細菌可保存 1~3 個月,酵母菌 2 個月,細菌1個月。
活化使用:
將斜面從冰箱中取出,細菌挑取菌落增菌,或霉菌切塊傳代培養(yǎng),培養(yǎng)好即可使用。
長期:冷凍保藏
冷凍保藏是目前使用較為廣泛的長期保藏法之一,適用于所各類微生物,較之于斜面保藏,減少了工作量,延長了保藏時間。
1. 準備斜面或平板新鮮培養(yǎng)物一個,10%的無菌甘油溶液;
2. 用甘油溶液將菌體或孢子洗脫下來,形成菌懸液;
3. 菌懸液分裝,凍存管裝液 1mL/支,后置于程序降溫盒;
4. 將程序降溫盒置于-80℃冰箱凍存;
5. 可保藏 1-2 年。
活化使用:
1. 將凍存菌株置于凍存盒中取出,準備水浴溶解,切勿常溫融化;
2. 將菌株迅速置于水浴速溶,細菌 40℃,真菌 30℃,約 2min 全部溶解后接種到適宜培養(yǎng)基;
3. 采用適宜條件培養(yǎng)完成即可。