分子診斷是以核酸作為檢測對象,主要應用于臨床各科的診斷中,如腫瘤、感染、遺傳等各方面,而核酸提取是分子診斷實驗的“第一步"。近年來,磁珠已成為核酸提取過程中最chang用的工具之一。
磁珠的概念和分類
根據不同的表面處理與標記,可將磁珠分成各種不同的應用類型:
TiO2磷酸化多肽富集磁珠
磁珠表面覆蓋有一層TiO2材料,可以選擇性的與磷酸化的an基酸殘基:絲an酸(Ser)、酪an酸(Tyr)、蘇an酸(Thr)結合,而與酸性的an基酸殘基的非特異性結合最小。與傳統的IMAC技術相比,其靈敏度提高了1000倍,富集后磷酸化蛋白的質譜檢出限達100 fmol。
谷胱gan肽(GSH)磁珠
該磁珠表面包被有瓊脂糖,并偶聯有谷胱gan肽,可以特異性的與谷胱gan肽-S-轉移酶(GST)結合,因而可用于純化帶有GST標簽的重組蛋白。TALON"磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co離子的固定化金屬離子親和技術(IMAC),可用于純化帶有組an酸標簽(6xHis)的重組蛋白。
Protein A和Protein G磁珠
帶有Protein A或Protein G基團的磁珠,可廣泛應用于IgG的純化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。
硅質膜磁珠
這是一類最早出現的產品,廣泛應用于DNA、RNA的純化。其原理類似于使用硅質膜的離心柱,磁珠在高鹽條件下與核酸結合,而在低鹽環境下被洗脫,可用于全血、組織、細菌、病毒、植物等的核酸純化。
反相RPC磁珠
類似于反向層析的原理,可用于多肽的分離純化。Jimenez等使用KingFisher96和Dynabead? RPC 18磁珠僅需20min就可以平行處理96個樣品,用于與疾病相關的血清中肽段表達譜的研究。
ChargeSwitch磁珠
ChargeSwitch磁珠的原理類似于離子交換技術,磁珠在pH & 6.5的緩沖液中帶正電,可與帶負電的核酸結合;在pH< 8.5的緩沖液中磁珠帶負電,使得之前吸附的核酸從磁珠上釋放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平臺上、wan美使用。
核酸提取新興力量——磁珠法
自沃森、克里克的DNA雙螺旋模型誕生,生物學進入到了一個全新的時代,在生物學界言必DNA,論必中心法則,對DNA的提取成為生物醫藥領域甚至農林牧漁等領域內所有學科科學研究的基礎,隨著基因診斷、轉基因食品檢測、個性化醫療等的快速發展,現在的核酸提取技術已經不能夠滿足當今生物技術的需要,急需能夠高通量、自動化的核酸提取方法。在這種背景下,磁珠法核酸提取應運而生。
核酸提取法的原理
核酸結合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時經過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進行“特異性結合",形成“核酸-磁珠復合物"。然后在外加磁場的作用下,復合物即分離出來。最后經過洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質。
磁珠法核酸提取的優勢
隨著基因檢測、個性化給藥、產前診斷等的普及,在生物行業各領域都追求高通量、自動化的今天,傳統DNA提取方法的局限愈來愈明顯,而磁珠法DNA提取的優勢則愈來愈明顯:能夠實現自動化、大批量操作;操作簡單、用時短;不使用傳統方法中的苯、lv仿等有毒試劑,安全無毒wan全符合現代環保理念;與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。
磁珠法提取DNA試劑盒要比傳統的方法(Chelex100 法、有機法、二氧化硅法、鹽析法等)更為簡單、方便,轉移離心管的次數較少,不易污染等。遠慕生物可為您提供健全的全自動核酸提取實驗方案!