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一些細(xì)胞爬片小知識(shí)了解一下
點(diǎn)擊次數(shù):597 更新時(shí)間:2023-05-18

什么叫細(xì)胞爬片?
細(xì)胞爬片就是讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi),細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng),主要用于組織學(xué),免疫組織化xue,冰凍切片,細(xì)胞涂片,原位雜交等.

細(xì)胞爬片經(jīng)驗(yàn)總結(jié):
1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2.應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于 6 孔板、12 孔板或 24 孔板;裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開了。 如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時(shí)再將之切 開,這樣既保證了細(xì)胞均一性,又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗 20 遍,再置于無 水酒清中浸泡 6 小時(shí),再用三蒸水沖洗 3 遍(主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細(xì)胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用。烤干后可放入超凈臺(tái)中。
5.關(guān)于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時(shí)從來沒用過多聚賴氨酸,細(xì)胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、TUNEL 等凋亡檢測(cè)、免疫熒光等也從未脫過片。

細(xì)胞爬片:
1.yi酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于wan全培養(yǎng)基中。
2.加細(xì)胞時(shí),根據(jù)玻片的大小,先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使 玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過程注意無菌操作。
3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可 4.待細(xì)胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),作用一定時(shí)間后取玻片。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出 就可以了。如果要做諸如 24h,48h,72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話,將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞爬片的固定:
細(xì)胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。當(dāng)然,根據(jù)研究目的,PBS洗也不是 一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗,因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過程中有可能會(huì) 脫落。 另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候,我一般用培養(yǎng)皿或板,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬 片,這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標(biāo)記,為避免混淆,可用透明膠 帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存 2-3 個(gè)月的片子做免疫組化是沒有問題的。

以下為常用的固定液
1.冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。 將純的丙酮預(yù)先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會(huì)為固體的)細(xì)胞爬 片取出后,PBS洗 2 遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強(qiáng)的揮發(fā)性,注意將含有丙酮 和爬片的器皿蓋嚴(yán),防止其揮發(fā))固定 10 分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。

2.多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。 主要檢測(cè)組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細(xì)胞表面抗原,例如各類淋巴細(xì)胸分化決定簇 (CD)、主要組織相容性抗原等 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存。
3.95%乙醇,可用于免疫組化。
優(yōu)點(diǎn):穿透性強(qiáng)、抗原性保存較好。 缺點(diǎn):但醇類對(duì)低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕, 固定后可再溶解;染色過程中,溫育時(shí)間長(zhǎng),抗原可流失而減弱反應(yīng)強(qiáng)度 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存

4.甲醛(福爾馬林)應(yīng)用zui廣 優(yōu)點(diǎn):形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,且穿透性強(qiáng), 缺點(diǎn): 甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格 結(jié)構(gòu)可能部分或wan全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結(jié)果。 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存 。

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