一、平板劃線分離法 由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。

二、稀釋倒平板法 先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

稀釋涂布法：
優點：可以計數，可以觀察菌落特征。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。 一般用于平板培養基的回收率計數！！

稀釋混合平板法：
優點：可以計數，吸收量為1ml，較方便。
優點：不能觀察菌落特征。 一般用于菌落總數的計數！！

平板劃線法：
優點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離！！
缺點：不能計數