提取植物DNA常用的方法是CTAB法。
原理:CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物,只是不能沉淀核酸。通過有機溶劑抽提,去除蛋白,多糖,酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。
步驟如下:
1)取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;
(2)加入800 μl的CTAB提取緩沖液,混勻(CTAB在65℃水浴預(yù)熱),每5min輕輕震蕩幾次,20min后12000 r/min,離心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯仿(各400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等體積的氯仿,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min。
(5)重復(fù)步驟(4)1-2次,以蛋白層不出現(xiàn)為止;
(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,離心10 min;
(7)棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉淀2次;
(8)室溫下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去離子水中,于-20℃或者-70℃下保存?zhèn)溆谩?br/>