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【解決方案】BCA法測(cè)蛋白濃度樣品不溶解怎么辦
點(diǎn)擊次數(shù):266 更新時(shí)間:2023-05-15
 

  BCA法測(cè)蛋白濃度時(shí),樣品不溶解時(shí)按照以下方法解決操作。

  BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測(cè)定方法,其測(cè)定范圍是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更*的專(zhuān)用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。

  BCA 蛋白定量測(cè)定方法:(96孔板)

  1、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50 體積試劑A,1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液,充分混勻。

  2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6,8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10 微升;取10 微升待測(cè)樣品加入96 孔板。每個(gè)測(cè)定要做2-3 個(gè)平行。

  3、向帶測(cè)樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA工作液(即樣品與工作液的體積比為1:20)混勻。

  4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。

  5、酶標(biāo)儀562nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

  6、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品濃度。

  BCA 蛋白定量測(cè)定操作注意事項(xiàng):

  1、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外,還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品的濃度較高(>50μg/ml),反應(yīng)溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低(<50μg),反應(yīng)的溫度為60℃,該溫度下,色an酸、酪an酸和肽鍵得到充分氧化,大大提高檢測(cè)靈敏度。

  2、該方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml;當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時(shí),推薦60℃溫浴,并將蛋白液:工作液的比例調(diào)至1:8 進(jìn)行測(cè)定(增強(qiáng)法)可以檢測(cè)到5ug/ml。

  試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在-20℃,短期則4℃保存。

 


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