1 膽鹽乳糖培養基
新鮮配制100mL/瓶的對照膽鹽乳糖培養基4瓶,121℃滅菌15min,備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃se葡萄球菌各1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變渾濁;培養48h,空白培養瓶和接種金黃se葡萄球菌的培養瓶應不得渾濁;
2 MUG培養基
新鮮配制50mL/瓶的對照MUG培養基4瓶,121℃滅菌15min,備用。接種大腸埃希菌2支,接種菌液0.2mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照,培養5h,在366nm紫外光燈下觀察結果;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。空白培養基應不得渾濁,且366nm處觀察無熒光;與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變渾濁,366nm處應呈熒光。若熒光不明顯,則可延長至24h觀察。
3 曙紅ya甲藍瓊脂培養基(EMB)
新鮮配制對照EMB瓊脂培養基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培養8h后備用。取5個無菌EMB瓊脂平板,分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養18h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養24h,空白平板應無菌落生長。
4 麥康凱瓊脂培養基
新鮮配制對照麥康凱瓊脂培養基121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培養8h后備用。取5個無菌麥康凱瓊脂平板,分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各5皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養18h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養24h,空白平板應無菌落生長。
5 乳糖膽鹽發酵培養基
新鮮配制10mL/支的對照乳糖膽鹽發酵培養基,121℃滅菌15min,備用。取5支,分別接種大腸埃希菌和金黃se葡萄球菌,各2支,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變色、渾濁,且有導管中應有明顯的產氣現象;培養24h,空白培養管和接種金黃se葡萄球菌的培養管應不得變色、不得渾濁。
6 乳糖發酵培養基
新鮮配制10mL/支的對照乳糖發酵培養基,121℃滅菌15min,備用。取3支,接種大腸埃希菌2支,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變色、渾濁,且有導管中應有明顯的產氣現象;培養24h,空白培養管應不得變色、不得渾濁。
7 營養肉湯培養基
新鮮配制100mL/瓶的對照營養肉湯培養基3瓶,121℃滅菌15min,備用。分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃se葡萄球菌各1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變渾濁;培養48h,空白培養瓶應不得渾濁。
8 四硫磺酸鈉亮綠培養基(TTB)
新鮮配制10mL/支的對照四硫磺酸鈉亮綠培養基基礎,121℃滅菌15min,備用。臨用前,無菌操作加入0.2ml碘試液和0.1mL亮綠試液。取5支,分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃se葡萄球菌各2支,接種菌液1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基上清渾濁;培養24h,空白培養管和接種金黃se葡萄球菌的培養管應不得渾濁。
由于TTB中的碳酸鈣對渾濁現象觀察有影響,因此若渾濁現象不明顯,則將各培養物接種至膽鹽硫乳瓊脂(DHL)或沙門、志賀屬瓊脂(SS)平板上劃線觀察TTB培養物生長情況,空白對照和接種金黃se葡萄球菌的培養管劃線后應無菌落生長,對照和被檢TTB培養基劃線接種至瓊脂平板后應有菌落生長、且顏色形態一致。
9 膽鹽硫乳瓊脂培養基(DHL)
新鮮配制對照DHL瓊脂培養基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌DHL瓊脂平板,涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養18h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養48h,空白平板應無菌落生長。
10 沙門、志賀屬瓊脂培養基(SS)
新鮮配制對照SS 瓊脂培養基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌SS 瓊脂平板,涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養18h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養48h,空白平板應無菌落生長。
11 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基基礎
新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取7個無菌瓊脂平板,分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養18h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養24h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
12 綠膿菌素測定用培養基(PDP)
新鮮配制對照綠膿菌素測定用培養基基礎,每升培養基中加入10mL甘油,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取3個無菌綠膿菌素測定用瓊脂平板,涂布接種銅綠假單胞菌2皿,接種菌液0.1ml(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養24h;被檢培養基同法操作。空白平板應無菌落生長,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致。
13 亞碲酸鹽肉湯培養基
新鮮配制100mL/瓶的對照營養肉湯培養基3瓶,121℃滅菌15min,備用。臨用前,加入新鮮配制的無菌1%亞碲酸鹽0.2mL。分別接種金黃se葡萄球菌和大腸埃希菌各1瓶,接種菌液1ml(不大于100CFU),另一瓶不接種菌株作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養18h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變黑、變渾濁;培養48h,空白培養瓶和接種大腸埃希菌的培養瓶應不得渾濁。
14 卵黃氯化鈉瓊脂培養基
新鮮配制對照卵黃氯化鈉瓊脂培養基基礎,121℃滅菌15min,冷卻至60℃,參照2020版《中國藥典》比例無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液,充分振搖后傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板,分別涂布接金黃se葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1ml(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置;被檢培養基同法操作。培養24h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
15 甘lu醇氯化鈉瓊脂培養基
新鮮配制對照甘lu醇氯化鈉瓊脂培養基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板,分別涂布接種金黃se葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置;被檢培養基同法操作。培養24h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
16 梭菌增菌培養基
新鮮配制100mL/瓶的對照梭菌增菌培養基2瓶,121℃滅菌15min,備用。接種生孢梭菌1瓶,接種菌液1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌株作為空白對照,置規定溫度的厭氧條件培養48h;被檢培養基同法操作。空白培養瓶應不得渾濁;與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變渾濁。
17 哥倫比亞瓊脂培養基
新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取3個哥倫比亞瓊脂平板,涂布接種生孢梭菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后置規定溫度的厭氧條件下倒置培養;被檢培養基同法操作。培養48h,空白平板無菌落生長;被檢培養基菌落大小、形態特征應與對照培養基上的菌落一致。
哥倫比亞瓊脂培養基營養豐富,適宜多數需氧菌的生長,為了消除其它雜菌生長對檢查結果的影響,可在每升滅菌后培養基中按無菌操作添加含有相當于20mg慶da霉素的硫酸慶da霉素。添加慶da霉素的哥倫比亞瓊脂可參照上述方法進行培養基適用性考察。
18 沙氏葡萄糖肉湯培養基
新鮮配制100mL/瓶的對照沙氏葡萄糖肉湯培養基2瓶,121℃滅菌15min,備用。接種白色念球菌1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養基同法操作,置規定溫度培養。培養48h,與對照培養基比較,被檢培養基中試驗菌應生長良好,表現為液體培養基變渾濁;培養72h,空白培養瓶應不得渾濁。
19 沙氏葡萄糖瓊脂培養基
新鮮配制對照沙氏葡萄糖瓊脂培養基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。取3個沙氏葡萄糖瓊脂平板,涂布接種白色念球菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養24h,被檢培養基上的菌落大小、形態特征、顏色及氣味應與對照培養基上的菌落一致;培養72h,空白平板應無菌落生長。
20 念球菌顯色培養基
新鮮配制對照念球菌顯色培養基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養箱預培8h后備用。念球菌顯色平板使用前避光保存,取5個無菌念球菌顯色平板,分別涂布接種白色念球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養24h,被檢培養基菌落大小、形態特征及顏色應與對照培養基上的菌落一致;培養72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應無菌落生長。
21 1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基
新鮮配制對照1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基基礎,每升培養基中加入10mL聚山梨酯80,121℃滅菌15min,冷卻至60℃后,傾注平皿, 35℃培養箱預培8h后備用。取3個1%聚山梨酯80-玉米瓊脂平板,涂布接種白色念球菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規定溫度倒置培養;被檢培養基同法操作。培養24h,被檢培養基菌落大小、形態特征及芽管指示能力應與對照培養基上的菌落一致;培養48h,空白平板應無菌落生長。