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【遠慕技術】BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗
點擊次數(shù):282 更新時間:2023-04-26

BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(BAS-ELISA)是ELISA的一種改良技術,將BAS,即生物su-親和素系統(tǒng)(biotin avidin system)引入ELISA,大大提高了ELISA的靈敏度。

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(一) 親和素和生物su

1. 親和素(avidin) 給動物飼喂大量卵白蛋白后,可引起生物su缺乏癥,此后證明,卵白蛋白中存在一種對生物su有異常親和力的堿性蛋白,稱之為抗生物su蛋白或卵白素,現(xiàn)今均稱為親和素。因為親和素存在于卵白蛋白中,故可從雞蛋白清中提取親和素,它是由四個相同的亞基組成的堿性糖蛋白,分子量6.6~6.8萬,等電點為10.5,由于每個亞基都可以結合一個生物su分子,所以親和素呈四價反應性,在血清學反應中,可以產生新的放大作用;現(xiàn)規(guī)定凡結合1μg生物su所需親和素的量,即為親和素的一個活性單位,1mg純親和素約含13~15個活性單位。

2. 生物su(biotin) 即維生素H,主要存在于卵黃、腎、肝等組織中,除可提取外,也能人工合成,另外在動植物體內也廣泛存在,系結構簡單的小分子物質,分子量244.31,它不能直接與親和素結合,需活化后,產生生物su衍生物(即生物su酰羥基丁二酰亞胺,HS,為白色結晶,熔點200~202℃)才能與親和素結合。另外,它還能高比度地偶聯(lián)抗體等反應物質和酶等標記材料,分別制成生物su化抗體和生物su化酶等,在免疫反應中起到一級穩(wěn)定的放大作用。

因為親和素對生物su有ji強的特異性結合作用,且具有多價性,據(jù)此,可以建立生物su化抗體-親和素-生物su化酶復合物酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測體系,利用親和素為中介,一端通過生物su化抗體聯(lián)接檢測抗原的免疫反應系統(tǒng),另一端通過生物su化酶等連接標記顯示系統(tǒng),可產生多極放大作用,從而明顯地提高了檢測的特異性和敏感性。

(二) BAS-ELISA的技術類型 該檢測系統(tǒng)可分為以下兩類:

1. BAB法 (biotin-avidin-biotin) 即以游離的親和素分別橋聯(lián)生物su化抗體和生物su化酶的檢測方法。目前最chang用的是本法的改良法,即預先使親和素與生物su化酶形成復合物(avidin-biotin-peroxidase complex, ABC),再使其與生物su化抗體反應,因而叫做ABC法,此法既減少了反應步驟,又因ABC網(wǎng)格結構可網(wǎng)絡數(shù)量極為可觀的酶分子,從而使BAS的靈敏度又得到了進一步的提高。

2. BA法 (Ab-biotin-avidin-HRP)即直接以酶標親和素聯(lián)接生物su化抗體,檢測抗原的方法。

為簡化反應程序,廠家試制了酶聯(lián)BAS試劑,連接被檢測的免疫反應系統(tǒng)是生物su化抗體,即生物su化抗抗體-羊抗兔(SARG-b)和兔抗小鼠(RAMG-b)及一種生物su化抗體-生物su化馬抗人AFp。較常用的生物su化酶是生物su化辣根過氧化物酶(bHRP)。

(三) BAS-ELISA在檢測工作中的應用 該技術應用最多的一個方面是檢測可溶性抗原如細菌和病毒等,以及它們的相應抗體,現(xiàn)舉例如下:

1. 細菌性抗原的檢測 Yolken等采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測流感桿菌b型、肺炎球菌和鏈球菌抗原等,先用相應抗體包被酶標板,然后分別加入細菌培養(yǎng)上清液、生物su化抗體和親和素與生物su化酶復合物來實施反應;本法檢測的靈敏度比常規(guī)ELISA和熒光抗體法高4~16倍。

2. 病毒性抗原的檢測病毒性抗原也可用雙抗體夾心法檢測,如檢出糞便中的輪狀病毒,可用抗體包板,再相繼加入待檢標本、生物su化抗體、親和素和3H標記的生物su,然后作放射免疫測定。國內已用此法檢測單純皰疹病毒、巨細胞病毒、肺炎病毒及其相應抗體。

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