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電鏡固定液選擇及配制了解一下
點(diǎn)擊次數(shù):410 更新時(shí)間:2023-04-19

自1931世界shang第1臺(tái)電子顯微鏡誕生以來,微觀世界的大門開放的更加廣闊。目前電鏡被廣泛運(yùn)用于各器官系統(tǒng)疾病的病理診斷中,除了運(yùn)用在腫瘤的診斷與鑒別診斷中,用得最多的是腎臟活檢和某些皮膚疾病的診斷,其中透射電子顯微鏡是最早,最guang泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種電鏡。隨著電鏡在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用,人類通過觀察細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)的各種細(xì)胞器和細(xì)胞核的細(xì)微結(jié)構(gòu)及其病理變化,由此產(chǎn)生了亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)病理學(xué)(substructural pathology),又稱超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)(ultrastructural pathology)。

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下面遠(yuǎn)慕為大家介紹電鏡生物樣品固定液的選擇及其配方:

1、緩沖液的配制

在配制固定液之前,應(yīng)先配制緩沖液。

0.2M磷酸緩沖液的配制:

磷酸2氫鈉(NaH2PO4.H2O) 2.6g

磷酸氫2鈉(Na2HPO4.12H2O) 29g

重蒸餾水加至500ml

調(diào)pH至7.4

2、(灌注)固定液的配制

4%多聚甲醛:用0.2M磷酸緩沖液配制,重蒸餾水補(bǔ)足容積。

4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛,以4%多聚甲醛+1%戊二醛為例,配方如下:

0.2M磷酸緩沖液的配制 100ml

25%戊二醛(電鏡專用) 4ml

重蒸餾水加到200ml

多聚甲醛和戊二醛混合固定液配制方法:

(1)4%多聚甲醛+5%戊二醛:溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動(dòng)使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加10ml 25%戊二醛,再加15ml 0.2PB,調(diào)pH備用。此固定液中含多聚甲醛4%,戊二醛5%,屬高滲液,但固定效果不錯(cuò),尤其對細(xì)胞內(nèi)的微管保存較好。

(2)2%多聚甲醛+2%戊二醛:溶解1g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動(dòng)使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加4ml 25%戊二醛,再加21ml 0.2PB,調(diào)pH備用。常規(guī)固定選用這種配方。

(3)4%多聚甲醛+0.5%戊二醛:溶解2g多聚甲醛于25ml雙蒸水中,80℃水浴,搖動(dòng)使之溶化后加1-3滴1M NaOH,使溶液澄清。冷卻后加1ml 25%戊二醛,再加24ml 0.2PB,調(diào)pH備用。推薦用作免疫電鏡標(biāo)本固定劑,對于抗原較強(qiáng)的標(biāo)本,可將濃度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。


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