血涂片染色廣泛應用于醫學檢驗和組織學教學片的制作。傳統的染色方法有Wright氏、Giemsa氏和WrightGiemsa混合法,作為醫學檢驗以簡單快捷為shou選,而要制作教學標本,則對染色效果、標本存放時間要求更高,對此,我們對各種染色方法進行了長期的探索和比較,以期找到較穩定的、效果滿意的染色方法用于制作大批量教學標本。
1 材料與方法
1.1 采集標本 用消毒采血針頭扎刺手指頭或耳垂,滴取黃豆大小血滴于潔凈載玻片上,推成均勻血膜,自然晾干,用甲醇固定2 min~5 min。大量制作教學標本可一次推出所需血膜,固定待用。
1.2 染色
1.2.1 Giemsa氏染色法 將Giemsa原液(配制1年后)分別與pH 6.4、6.6、6.7、6.8的磷酸鹽緩沖液按1∶10的比例配成工作液;將固定好的血片分別滴染以上4種工作液,每種染液又分別染25 min、30 min、45 min、60 min,自來水沖洗、鏡檢。
1.2.2 Wright氏染色法 染液按傳統方法預先配好,我們使用配制1個月后的Wright氏染液,用前用pH 7的磷酸鹽緩沖液稀釋1倍,分別染5 min、10 min、15 min,然后用自來水沖洗干凈、鏡檢。
1.2.3 Wright-Giemsa混合法 取Giemsa原液1份、Wright氏原液5份、pH 6.7的磷酸鹽緩沖液6份配成染液,滴染10 min、15 min、20 min,然后用自來水沖洗干凈、鏡檢。
2 結果
2.1 Giemsa滴染 用pH 6.7的磷酸鹽緩沖液配制的工作液染色45 min的血片,紅細胞呈桔紅色,白細胞核呈紫藍色,中性顆粒淺紅色,嗜酸性顆粒桔紅色,淋巴細胞胞質淺藍色,單核細胞胞質灰藍色,血小板紫藍色。而pH<6.7和染色時間較短者,則核染色偏紅或難著色,pH>6.7則核呈藍色,嗜酸性顆粒顏色偏暗。
2.2 Wright氏染液滴染 染色15 min,細胞核和血小板紫紅色,其他結果與Giemsa滴染相似,染色時間過短則核難著色,時間過長,則易使染液揮發而造成污染。
2.3 Wright-Giemsa混合染色 細胞核呈紫藍色,紅細胞紫紅色,其他結果與Wright氏滴染相似。
3 比較與討論
三種染色法均為傳統染色法,各有優缺點:Giemsa氏染色法,染色過程易控制、不污染是其最大的優點,染色效果對染液pH值要求高,經過反復多次試驗,以pH 6.7染色效果最hao,各種細胞的特性顯示清楚,但染色時間長是其缺點,故此法較適于制作教學標本用;Wright氏染色法的優點是染色時間短,結果出現快,較適于臨床檢驗,但其染色過程不易掌握、易污染是其缺點;WrightGiemsa混合法雖能對兩種染法起互補作用,但染液變性快、易污染,也不適于教學標本染色。
4 體會
各種涂片染色后,不要傾去染液,否則易使染液沉淀在片上;直接用自來水沖洗比用蒸餾水或緩沖液沖洗更方便、徹di,可通過調大水壓及時沖去結合尚未牢固的染料沉渣。