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實驗室常用的耐熱DNA聚合酶簡介
點擊次數(shù):280 更新時間:2023-03-31

耐熱DNA聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除 錯配,切 平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同,可以將耐熱DNA聚合酶分為三類,下面遠慕生物簡單介紹一下。

一、普通耐熱DNA聚合酶

Taq DNA 聚合酶

由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出,是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種,達200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中對某些單核苷酸錯配沒有校正功能。

TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性,可將PCR雙鏈產(chǎn)物的每一條鏈3'加入單 核苷酸尾,故可使PCR產(chǎn)物具有3'突出的單A核苷酸尾;另一方面,在僅有dTTP存在時,它可將 平端的 質(zhì)粒的3'端加入單T核苷酸尾,產(chǎn)生3'端突出的單T核苷酸尾。應(yīng)用這一特性,可實現(xiàn)PCR產(chǎn)物的 T-A克隆法。

Tth DNA 聚合酶

從Thermus thermophilus HB8中提取而得,該酶在高溫和MnCl2條件下,能有效地 逆轉(zhuǎn)錄RNA;當(dāng)加入Mg2+后,該酶的聚合活性大大增加,從而使cDNA合成與擴增可用一種酶催化。

二、高保真DNA聚合酶

pfu DNA 聚合酶

是從Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正 PCR擴增過程中產(chǎn)生的錯誤,使產(chǎn)物的 堿基 錯配率極低。PCR產(chǎn)物為 平端,無3'端突出的單A核苷酸。

Vent DNA 聚合酶

該酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除錯配的堿基,具有校對功能。

三、DNA序列測定中應(yīng)用的耐熱DNA聚合酶

測序級TaqDNA聚合酶

是在TaqDNA聚合酶的基礎(chǔ)上對它進行修飾,去除5'-3'外切酶活性,保證測序記過的高度準(zhǔn)確性,可產(chǎn)生強度均一的測序條帶,背景清晰。

Bca Best DNA 聚合酶

從Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提純,并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長性能*;可抑制 DNA二級結(jié)構(gòu)形成,可以得到均一的DNA測序帶。

Sac DNA 聚合酶

從酸熱浴流化裂片菌中分離,無3'-5'外切酶活性,可用于DNA 測序,但測序反應(yīng)中ddNTP/dNTP的比率要高。

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