膠原蛋白是一種天然高分子化合物,具有一定的凝膠強度,乳化性、低黏度性、生物相容性、吸水和保濕性等,廣泛應用于食品、醫藥保健品、化妝品等行業中。膠原蛋白主要存在于動物皮、骨、軟骨、牙齒、肌腱、韌和血管中。
原料檢測及膠原蛋白提取方法:
1、原料成分基礎檢測 水分測定--直接干燥法 灰分測定--550℃灰分法 粗蛋白檢測--凱氏定氮法 脂肪測定--索氏抽提法
2、魚尾預處理,去除殘肉、硬骨、脂肪,等誰清洗,有機溶劑去除脂溶性色素,脫鈣、除蛋白后,冷凍備用。
3、膠原蛋白提取 4℃下膠原蛋白提取最佳工藝為鹽酸胍濃度3mol/l、wei蛋白酶添加量3.0%、提取時間72h、料液比1:50(g/ml)、提取次數2次。純化:在以上粗膠原蛋白中加入NaCI至溶液濃度終濃度為3.0mol/l,同時析出絮狀沉淀,4℃,4000r/min離心15min,重復兩次,透析,冷凍干燥,即得。
膠原蛋白含量檢測方法:
1、紫外可見分光光度法
往封蓋的試管中加入樣品4-6mg,加入6mol/l鹽酸溶液5ml,在110℃分解24h后,蒸餾水定容到25ml,在40℃下用旋蒸除去水和鹽酸,添加30ml蒸餾水溶解,吸取0.5ml測定吸光度,按表曲算出濃度。
2、聚丙烯酰胺電泳法
采用垂直板電泳,先配置2.5mg/ml的膠原蛋白溶液,與樣品處理液混合,在沸水中加熱4min,冷卻備用,用7.5%丙烯酰胺對膠原蛋白進行電泳分析,采用考馬斯亮藍R250染色,體積分數為10%醋酸和30%甲醇脫色。
3、液相色譜法
鯽魚組織鹽酸110℃水解18h,Dns-Ci衍生,然后以甲醇和四氫呋喃-甲醇-0.05mol/l乙酸鈉溶液為流動相,在反相C18柱上進行分離。在20-400μg/ml范圍內關系良好。