很多老師在設計科研實驗的時候都會很迷茫,到底用什么細胞好? 越來越多的老師開始傾向于原代細胞的科研實驗,在設計實驗中,原代細胞和細胞株到底該怎么選擇呢?
原代細胞的定義:
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養,此時的細胞保持原有細胞的基本性質,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數。但實際上,我們通常把第1代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。
原代細胞因為可以模擬機體的功能,主要用于:生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究
下面遠慕為大家整理了一些培養原代細胞的小知識:
解凍
原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶,并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養箱中,我們在使用cell systems的原代視網膜內皮細胞時,復蘇的時候沒有去離心,第二天換個液就可以。
傳代
原代細胞有間隙抑制接觸不良反應,所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代,一般蕞有效的建議觀察細胞的生長周期,Cell Systems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代蕞佳,當生長至100%匯合時,它就會衰老。記住,所有的原代細胞不是100%純,因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時,使用低濃度的yi蛋白酶,并在顯微鏡下密切監測細胞。此外,記得在yi蛋白酶消化后wan全中和細胞中的yi酶,因為任何活性的yi蛋白酶都將損傷細胞。
凍存
通常我們不推薦重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感,重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。
與細胞系不同,原代細胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型,你應該密切監測細胞形態,因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。
正常的原代細胞培養,在無污染的情況下,建議培養基中不加抗體,抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數據有差異,所以cell systems的細胞在分離提取時就考慮到這點,他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時,通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度,這樣得到的實驗數據更為準確。