質(zhì)粒表達(dá)載體具有克隆載體的基本元件還具有轉(zhuǎn)錄/翻譯所必需的DNA順序的載體。天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷,不能滿足克隆載體的要求,因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。
質(zhì)粒表達(dá)載體按進(jìn)入受體細(xì)胞的類型可分為:
原核載體;真核載體;穿梭載體指在兩種宿主生物體內(nèi)復(fù)制的載體分子,因而可以運(yùn)載目的基因(穿梭往返兩種生物之間)。穿梭質(zhì)粒含原核和真核生物2個(gè)復(fù)制子,以確保兩類細(xì)胞中都能擴(kuò)增。
質(zhì)粒表達(dá)載體之質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移方法:是細(xì)菌遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要方式。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)移過(guò)程中,供體菌和受體菌通過(guò)結(jié)合作用緊密接觸,質(zhì)粒從供體細(xì)胞向受體轉(zhuǎn)移,同時(shí)進(jìn)行質(zhì)粒復(fù)制。按能否自主轉(zhuǎn)移,可以將天然存在的質(zhì)粒分為轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒和非轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒兩大類。這里要注意的是,獲得質(zhì)粒的細(xì)菌可隨之而獲得一些生物學(xué)特性,如耐藥性或產(chǎn)生細(xì)菌素的能力等。從環(huán)境友好出發(fā),實(shí)驗(yàn)室里的廢棄菌液,一定要滅過(guò)菌才能倒哦。
質(zhì)粒載體按功能可分為這些:
整合質(zhì)粒:裝有整合促進(jìn)基因及位點(diǎn) 便于外源基因的整合。
探針質(zhì)粒:裝有報(bào)告基因 便于啟動(dòng)子等元件的克隆篩選。
高拷貝質(zhì)粒:突變拷貝數(shù)控制基因 拷貝數(shù)1000-3000擴(kuò)增基因。
低拷貝質(zhì)粒:來(lái)自pSC101 拷貝數(shù)小于10 表達(dá)某些毒性基因。
測(cè)序質(zhì)粒:含有測(cè)序通用引物互補(bǔ)序列和多酶接頭polylinker。
溫敏質(zhì)粒:在不同溫度下表現(xiàn)出拷貝數(shù)、整合等不同性質(zhì)。