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糖類檢測方法,科研人必看!
點擊次數:290 更新時間:2022-12-05

對于糖的測定方法有很多,大致可分為三類
1.物理法,(1.旋光法,  2 .折光法,  3.比重法,)
2.物理化學法,(1.點位法, 2極普法, 3.光度法, 4.色譜法)
3.化學方法,(1.斐林氏法. 2.高錳/酸鉀法. 3.碘量法. 4.鐵氰/化鉀法. 5.蒽銅比色法. 6.咔唑比色法)
共計三大種,在測定其他碳水化合物時,往往是使其水解為糖再進行測定。

一.總糖的測定
食品中的總糖主要指具有還原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在測定條件下能水解為
還原性的單糖的蔗糖(水解后為1分子葡萄糖和1分子果糖),麥芽糖(水解后為2分子葡萄糖)以及可能部分水解的淀粉(水解后為2分子葡萄糖)。還原糖類之所以具有還原性是由于分子中含有游離的醛基(-CHO)或酮基(=C=O)。
測定總糖的經典化學方法都是以其能被各種試劑氧化為基礎的。這些方法中,以各種根據斐林氏溶液的氧化作用的改進法的應用范圍最/廣。在這里我們主要給大家介紹鐵氰/化鉀法,蒽銅比色法,斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反應復雜,影響因素較多,所以不如鐵氰/化鉀法準確,但其操作簡單迅速,試劑穩定,故被廣泛采用。蒽銅比色法要求比色時糖液濃度在一定范圍內,但要求檢測液澄清,此外,在大多數情況下,測定要求不包括淀粉和糊精,這就要在測定前將淀粉,糊精去掉,這樣就使操作復雜化,限制了其廣泛應用。

(一)鐵氰/化鉀法
1.原理:樣品中原有的和水解后產生的轉化糖都具有還原性質,在堿性溶液中能將鐵氰/化鉀還原,根據鐵氰/化鉀的
濃度和檢驗滴定量可計算出含糖量。其反應為下:
C6H12O6+6K3[Fe(CN)6] + 6KOH→(CHOH)4·(COOH)2+ 6K4[Fe(CN)6]+ 4H2O
滴定終了時,稍過量的轉化糖即將指示劑次甲基蘭還原為無色的隱色體。

2,試劑
1)1%的次甲基蘭指示劑
2)鹽酸(水解作用)
3)10%和30%的NaOH溶液
4)1%鐵氰/化鉀(貯存特色瓶,臨用前標定)

標定步驟
稱蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→搖勻→65-70℃水裕15分鐘→取出冷卻→用30%NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1%鐵氰/化鉀于錐形瓶中→加10%NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠顆粒→加熱至沸→保持一分鐘→加次甲基蘭1滴→立即以糖液滴足至藍色退去為止,記錄用量。
正式滴定比較滴定時少0.5ml糖液,煮沸1分鐘,加指示劑一滴,再用糖液滴定至蘭色褪去,計算鐵氰/化鉀溶液的濃度。
A=(W·V)/(1000×0.95)
A:相當于10ml鐵氰/化鉀溶液的轉化糖的量(克)
V:滴定時消耗的糖液的體積
W:稱取純蔗糖的量
1000:稀釋比
0.95:換算等數

3.操作方法
稀釋10g→用100ml水作溶液→于250ml容量瓶→加20%醋酸鉛10ml→至沉淀完為止→加10ml10%NA2HPO4→至不在產生沉淀為止→加水至刻度→過濾-取濾液50ml→于100ml容量瓶中→按鐵氰/化鉀標定法進行轉化,中和及滴定

計算糖含量
總糖(以轉化糖計%)= (A×1000)/(W·V)×100
A:相當于10ml鐵氰/化鉀溶液的轉化糖的重量,
W:樣品的重量
V:滴定時樣液消耗的體積

4.實驗應注意
(a)達終點時,過量的轉化糖將指示劑次甲基蘭還原為無色的隱色體,隱色體容量受空氣中氧所氧化,很快又變
成指示劑的顏色。
(b)整個過程應在低溫電爐上進行,滴定要速度,否則終點不明顯
(c)糖與硫酸反應脫水生成羥甲基呋喃甲醛,生產物再與蒽銅縮合成蘭色化合物,其顏色深淺與溶液中糖的濃度
成正比,單、雙糖等糖類都直接于試劑發生作用,因此不需要水解。

(二)蒽銅的比色法
1.原理:糖與硫酸反應脫水生成羥甲基呋喃甲醛,生產物再與蒽銅縮合成蘭色化合物,其顏色深淺與溶液中糖的濃
度成正比,可比色定量。

2.試劑
(1)硫酸鋅溶液:溶解500g化學純硫酸鋅于500ml水中
(2)亞鐵氰/化鉀溶液:溶解10.6g化學純亞鐵氰/化鉀于100ml水中
(3)0.2%蒽銅試劑:溶解蒽銅0.2g于100ml95%硫酸中,置棕色瓶中冷暗處保存
(4)0.1%葡萄糖液:準確稱干燥葡萄糖0.1000g定容100ml

3.操作方法
(1)標準曲線繪制
(2)100ml容量瓶編號
沸水浴加熱6分鐘,取出冷卻→用1cm比色杯→610nm測定吸光度→作出以吸光度為橫坐標,糖液濃度為縱坐標的準
曲線
(3)樣品測定
稱10g樣品→于100ml熱水加入500ml容量瓶中-加硫酸鋅5ml→沸水浴5分鐘→取出再搖動下加亞鐵/氰/化鉀5ml,→冷卻→定容500ml→過濾→吸濾液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀釋液1ml,于比色管中→加10ml蒽銅試劑→搖勻→水浴加熱6分鐘→冷卻→比色

試驗注意
1,樣液必須清澈透明,加熱后不應有蛋白質沉淀
2,樣品顏色較深時,可用活性炭脫色后再進行測定
3,此法與所用的硫酸濃度和加熱時間有關
4,所取糖液濃度在1-2.5mg/100ml之間

二.還原糖的測定方法
還原糖包括葡萄糖、果糖、麥芽糖,在葡萄糖分子中含有淤青的醛莖,在果糖分子中含有淤青的酮莖,在乳糖中和
麥芽糖中含有淤青的半縮羧莖,因此都有還原性。在測定還原糖時一般測定總糖時所有將糖類水解為轉化糖再測定
的方法都可用來測定還原糖。

(一)斐林氏容量法
1.此法的原理、試劑、方法與總糖的測定方法相同。只是樣品溶液不必以過轉化,而是直接取濾液進行滴定,濾液進行滴定,濾液中的還原糖含量以在0.2-0.5%為好,又能通過增減樣品量或改變稀釋倍數來調節。10毫升費林氏A、B液混合時理論上相當還原糖量如下:
葡萄糖(無水)果糖或轉化糖尿病  0.0500克
乳糖尿病                        0.0678克
麥芽糖                          0.0807克

2試劑
(1)斐林氏A液,稱69.8g cp硫酸銅于100ml水中,過濾備用
(2)斐林氏B液,稱34.6g.cp濃流鋅鈉和100gcp NaOH于1000ml水中,過濾備用

3方法
稱取樣品10-20g:制備與轉化同鐵氰/化鉀法。將樣液倒入滴管中,吸取A,B液準備預滴定

預滴定:
吸A、B液各5ml→從滴管中加15ml樣液→加熱至沸→繼續滴加樣液→至蘭色變潛→加3滴次甲基蘭→在1分鐘內滴定到終點
達到終點時,稍微過量的轉化糖,將蘭色的次甲基蘭染色體還原為無色的隱色體,而顯出氧化亞銅的紅色,去堿性條件下加熱糖的產物是復雜的。
去堿性中斷裂是由于堿度不同,加熱時間不同,生產不等的碎片,這種碎片給后面滴定帶來誤差,而且,這種碎片與糖沒有化合量的關系,所以,Lanecrol-Eynon Method作出數據檢索表

正式滴定:
吸A,B液各5ml→于三角瓶→加比預定量少0.5-1.0ml樣液→2分鐘內要求沸騰1分鐘→加3滴指示劑→用樣液滴定蘭色消失
總沸騰時間為3分鐘,即滴定在3分鐘完成。

計算:
還原糖=( F·V2)/(W·V1)×100
F:轉還糖回數,即與10ml斐林氏試液相當的轉化糖毫克數,
V1:樣品試液總體積
V2:樣品試液滴定量
W:樣品重量
在測量乳糖制品時,若蔗糖與乳糖的含量比超過3:1時,則應與滴定量中加上相關表中(課本中表9-8)校正值后在進行計算

我們舉例如下:
如果標準果糖溶液度為每100ml溶液含糖262.5mg。對于10ml斐林試液從9-5可以查得果糖液滴定應為20ml。如果不是20ml,可先算出A,B液校正等數。然后進行計算

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