檢測蛋白的實驗有很多種,WB實驗和ELISA實驗是比較常用的兩種實驗方法,這兩種方法哪一種的實驗結果更為可靠呢?有些人說ELISA自己包被抗體的話會比較麻煩,WB相比更加科學,容易被雜志接納。但是血清中沒有內參可以選擇。是不是ELISA實驗操作要簡單很多,那么又如何來解決這樣的一個問題呢?遠慕生物為您解答這個疑惑。
一、WB和ELISA的敏感性有所區別。雖然前者用ECL顯色敏感度可達pg級,但不同的樣品來源和抗體的質量,不能保證每次都到這個級別;而ELISA可以達到ng級。也就是說ELISA更適于豐度低的蛋白檢測。而且由于ELISA檢測所用的樣品少,也適用于樣品來源有限的蛋白濃度檢測。
二、在定量方面,ELISA一般用于定性,定量也可, WB可以做到半定量。
三、ELISA不如WB的特異性好。
四、關于血清內因子的檢測,如果WB檢得出就不要用ELISA。血清內參的問題,在ELISA里也一樣存在。操作來說ELISA當然簡單,但由于兩種方法各有優點,不能全面相互代替。
ELISA:
優點:靈敏,能夠定量(有標準品的情況下)
缺點:需要購買試劑盒(自己做試劑盒的話建議您放棄),價格昂貴(雙抗夾心法需要兩個抗體,當然貴?。?,而且需要排除假陽性假陰性的問題,需要考慮的問題較多。此外就是發文章沒有圖片不太好看(呵呵,自己的感覺)
WB:
優點:試劑便宜,認同度高,發文章沒有問題,如果用高靈敏度的發光試劑盒也可以達到非常高的靈敏度
缺點:操作步驟較多,如果實驗室沒有成熟的條件,想開展起來需要花一些功夫,分子量很大(個人認為>200kD)和很小(<5kD)的目的蛋白比較麻煩。