目前國際國內常用的菌種保存方法包括:定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃ 冰箱凍結法、液氮超低溫凍結法,其菌種復蘇方法如下:
(1) 定期移植法的菌種復蘇較簡單,直接轉接即可;
(2) 液體石蠟法保存的菌種在復蘇時,挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,生長繁殖后,再重新轉接一次;
(3) 沙土管法保存菌種在復蘇時,在無菌條件下打開沙土管,取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上,長出菌落后再轉接一次。或取沙土粒于適宜的液體培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)后再轉接斜面;
(4) 真空冷凍干燥法保存菌種在復蘇時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,將安瓿管頂部燒熱, 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現(xiàn)裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,進行適溫培養(yǎng);
(5) -80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇時,從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管,應立即放置38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止,約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內容物移至適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng);
(6) 液氮超低溫凍結法保存菌種復蘇與-80℃ 冰箱凍結法保存菌種復蘇相似,從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管,應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止,一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內容物移至適宜的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。