自霉菌和酵母菌計數(shù)正式開始實施以來,正置培養(yǎng)容易造成環(huán)境污染，一直比較困擾大家，很多小伙伴們反應(yīng)國標(biāo)霉菌正置培養(yǎng)容易污染，今天上海遠(yuǎn)慕生物就來為大家分析一下這個問題。

GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010，最大的區(qū)別可能就在于對平皿的培養(yǎng)方式。2016版的國標(biāo)在5.2中要求：瓊脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。

其實針對這一條，需要注意兩點：

第一，是需要對平板進(jìn)行觀察的，不能直接培養(yǎng)至第5天計數(shù)，因為霉菌的特殊性，在培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生大量孢子，導(dǎo)致整個平板蔓延。因此，在培養(yǎng)后的第2天開始，就要對平板進(jìn)行觀察，并計數(shù)典型菌落，而這樣的觀察在之后每一天都應(yīng)該進(jìn)行，直至培養(yǎng)第5天。

第二，就是正置培養(yǎng)。這一點是16版國標(biāo)與舊版最大的區(qū)別，10版之前的國標(biāo)都是倒置培養(yǎng)的。而進(jìn)行正置培養(yǎng)，很多朋友可能都會遇到平板被霉菌污染的問題，比如圖中的情況，這怎么解決呢？

遇到這種情況，一開始我們也是十分疑惑，檢測方法的霉菌是從哪里來的呢！

其實造成這種情況的原因有很多種，可能有培養(yǎng)箱環(huán)境污染，平皿冷凝水污染，操作環(huán)境污染、培養(yǎng)基問題等等，這些問題都該如何解決呢？

污染原因與解決措施

一、培養(yǎng)箱環(huán)境污染

很多實驗室培養(yǎng)霉菌采用的是專用的霉菌培養(yǎng)箱，所以培養(yǎng)箱空間里會有大量的霉菌孢子。而平皿的蓋和底是有一定縫隙的，尤其是玻璃平皿縫隙還是比較大的，正置培養(yǎng)中，孢子會向上飛揚通過縫隙落到平板的培養(yǎng)基上，導(dǎo)致污染。細(xì)心地實驗猿可能發(fā)現(xiàn)，污染的菌落大部分都是在平皿邊緣生長的。用一次性塑料平皿來培養(yǎng)，污染的概率就會小很多，因為一次性塑料平皿的蓋和底之間的縫隙相比之下是比較小的。因此培養(yǎng)箱環(huán)境中的孢子可能會是主要污染源。

這樣一來，解決的方法就應(yīng)該是對培養(yǎng)箱進(jìn)行殺菌。可以考慮用紫外線殺一下菌，同時輔助消毒劑擦拭的方法，常用消毒劑比如75%酒精和新潔爾滅等，應(yīng)該注意的是，這樣的殺菌操作也是需要經(jīng)常進(jìn)行的，因為霉菌的孢子是十分難清除的，而每次培養(yǎng)可能又會引進(jìn)新的污染源，可以考慮每周進(jìn)行兩次，保證培養(yǎng)環(huán)境無污染源。

二、平皿冷凝水污染

正置培養(yǎng)過程中，若是平皿的上蓋有泠凝水，在培養(yǎng)過程中冷凝水滴落到培養(yǎng)基上，也極容易造成菌落蔓延，平皿污染。因此在培養(yǎng)之前，一定要保證平皿干燥，可以把平皿放在37℃的環(huán)境里烘干，烘干之后再進(jìn)行培養(yǎng)，就會避免這個原因造成的污染。

三、操作環(huán)境和培養(yǎng)基的污染

因為無菌室里可能也會因為滅菌效果不理想造成污染。小編之前工作的實驗室，操作臺使用紫外線滅菌，經(jīng)常就會滅菌不*有孢子污染，尤其是在進(jìn)行過霉菌的相關(guān)檢測之后。所以在進(jìn)行過霉菌檢測之后，適當(dāng)?shù)脑鲩L滅菌時間，可能會達(dá)到比較理想的效果。另外，為了*解決無菌室空間孢子污染的問題，可以購買安裝臭氧發(fā)生器，通過紫外線+臭氧的雙重消毒模式，效果就十分理想了。

大家如果還是想驗證一下究竟是什么原因造成的污染，這里提供一個簡單的驗證試驗：在正常檢測的環(huán)境中倒一組空白平皿，將這些平皿分為AB兩組，其中A組用有充足氧氣的自封袋將平皿封好，B組不封，均放置在培養(yǎng)箱中正置培養(yǎng)。若是A組B組均有霉菌生長，則需要考慮培養(yǎng)基污染或者操作環(huán)境的污染；若是A組不生長霉菌而B組生長，則需要考慮是培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境污染。通過這個小試驗，可以基本上確定污染源，然后針對污染源進(jìn)行相應(yīng)的處理。