蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛,要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。
根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同,蛋白質(zhì)的分離純化可分為鹽析法和等電點沉淀法。鹽析一般是指溶液中加入無機(jī)鹽類而使溶解的物質(zhì)析出的過程。如:向某些蛋白質(zhì)溶液中加入某些無機(jī)鹽溶液后,可以降低蛋白質(zhì)的溶解度,使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。這是一種物理變化,可復(fù)原。
等電點沉淀法是利用蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最/低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點的特點進(jìn)行分離提取的方法。在等電點時,蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在,其分子凈電荷為零(即正負(fù)電荷相等),此時蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥,分子相互之間的作用力減弱,其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀,所以蛋白質(zhì)在等電點時,其溶解度最小,最易形成沉淀物。等電點時的許多物理性質(zhì)如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小,從而有利于懸浮液的過濾。
需要注意的是,不同的蛋白質(zhì),具有不同的等電點。在生產(chǎn)過程中應(yīng)根據(jù)分離要求,除去目的產(chǎn)物之外的雜蛋白;若目的產(chǎn)物也是蛋白質(zhì),且等電點較高時,可先除去低于等電點的雜蛋白。同一種蛋白質(zhì)在不同條件下,等電點不同。