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病毒血清學檢測的實驗方法
點擊次數:386 更新時間:2021-11-26

首先,你得知道什么是病毒血清學檢測,按照bai度百科的解釋,病毒血清學檢測是利用抗原與抗體的特異性反應檢測病毒及其抗體的血清學技術。包括中和實驗、紅細胞凝集實驗、補體結合實驗、蛋白檢測以及發光物質和熒光素標記的酶聯免疫吸附試驗( ELISA)等方法。近年來,免疫組化、免疫共沉淀、免疫轉印等技術在臨床也有了更多的運用,為病毒感染的實驗室檢測提供了基礎。

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一、血清樣本采集

在病程早期采集急性期血清,間隔2~3周后采集恢復期血清,有的病毒抗體出現早,應間隔1周左右采集第2份血清,以便早期診斷。采血前建議患者清淡飲食,盡量空腹。

二、進行血清學檢測的必要性

與聚合酶鏈反應(PCR)或病原菌培養檢測方法相比,血清學檢測結果對疾病的感染過程提供了不同的見解。血清學檢測可以確定人群中已被感染并產生相應抗體的“無癥狀感染者"以及感染后通過自身免疫系統產生相應抗體達到自愈的人群,基于檢測樣本中抗體的血清學檢測可以快速,經濟,高效,直觀地提供結果。

三、病毒血清學檢測的實驗方法

1.病毒中和實驗

是指病毒在活體內或細胞培養中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗。可用來檢查患病后或人工免疫后機體血清中抗體的增長情況,也可用來鑒定病毒或研究其抗原結構。病毒中和實驗可以在細胞培養、雞胚或動物上進行,一般將抗體做稀釋,與一定量的病毒混合,然后檢測其在細胞培養、雞胚或動物上的感染性。終點是以抑制細胞病變(細胞培養)或病毒復制(雞胚或動物)的抗體最高稀釋度來表示。中和抗體特異性高,維持時間較長,流行病學研究常用此法。

2.紅細胞凝集實驗

部分病毒如流感等表面有血凝素(糖蛋白),在一定條件下,能與雞、豚鼠紅細胞表面的糖蛋白受體結合而發生凝集現象。滴定病毒的血凝效價,便可大致估計病毒顆粒的數量(1個血凝單位=106病毒顆粒)。若血清中出現特異性抗體與相應病毒結合后,使病毒失去凝集紅細胞的能力,從而抑制血凝現象的出現,則稱為血凝抑制現象。利用血凝抑制實驗可以檢測和鑒定具有血凝特性的病毒,如流感病毒、乙腦病毒的輔助診斷和流行病學調查。該方法敏感、簡單、費用低,而且操作簡便。同時,也可用于抗體效價檢測。

3.補體結合實驗

用免疫溶血機制做指示系統,來檢測另一反應系統抗原或抗體的試驗,可以用于檢測動物血清中的病毒抗體,病毒抗原與抗體的相互反應可以引起補體結合,最終可導致膜溶解。在補體結合試驗中,如果反應系統中存在待測的抗體(或抗原),則抗原抗體發生反應后可結合補體;再加入指示系統時,由于反應液中已沒有游離的補體而不出現溶血,是為補體結合試驗陽性。如果反應系統中不存在的待檢的抗體(或抗原),則在液體中仍有游離的補體存在,當加入指示系統時會出現溶血,是為補體結合試驗陰性。因此補體結合試驗可用已知抗原來檢測相應抗體,或用已知抗體來檢測相應抗原。

4.沉淀實驗

可溶性抗原(如細菌的外毒素、內毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織滲出液等)與相應抗體結合,在適當量電解質存在下,形成肉眼可見的白色沉淀。目前臨床運用較少。

5.凝集實驗

顆粒性抗原與相應抗體結合后發生凝集的血清學試驗。抗原與抗體復合物在電解質作用下,經過一定時間,形成肉眼可見的凝集團塊。臨床常用于鑒定菌種和梅毒感染的確認。

6.病毒蛋白檢測

病毒侵入宿主細胞后可合成自身結構蛋白與非結構蛋白,也可與宿主細胞發生相互作用而上調或下調宿主蛋白的表達,除直接檢測病毒外,也可檢測與病毒發生作用的蛋白。在檢測分類上可根據檢測對象分為抗原檢測和抗體檢測,也可根據檢測方法分為定性檢測和定量檢測,根據標記物結合于抗體還是抗原分為直接檢測和間接檢測。臨床常用病毒蛋白的檢測方法包括ELISA技術、免疫印跡技術等,均可用標記有酶、發光底物或熒光素的抗體或抗原檢測病毒抗原或針對病毒產生的抗體。

免疫酶染色技術包含直接免疫染色和間接免疫染色方法,直接免疫染色法利用熒光素或酶標記,可識別病毒抗原的特異性抗體與感染細胞或組織樣本作用,而間接免疫染色法是利用熒光素或酶標記抗抗體,用病毒特異性抗體與感染細胞或組織樣本作用后,再加入熒光素或酶標記的抵抗抗體作用。間接法較直接法敏感,而且使用方便,可用于多種病毒抗原的檢測,不需要提純病毒的特異性抗體和繁瑣的標記過程。


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