細胞培養實驗中,培養基有著不可取代的地位。大家知道,血清是的天然培養基,而無血清培養基也有著功不可沒的作用,被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。遠慕生物為您分析解說無血清培養基在細胞培養實驗中的適應性:
一、適應方法
1.直接適應細胞從血清的培養基為基。
2.連續的適應或脫機細胞從血清的培養基為SFM在幾個步驟。
連續的適應往往是細胞比直接適應嚴酷少。
二、連續的適應
通道1,75%血清的培養基:25%基
通道2,50%血清的培養基:50%基
通道3,25%血清的培養基:75%基
從75%到100%的變化可能是太緊張的SFM細胞,可能需要把細胞2–3通道在10%血清的培養基:90% SFM混合物。大多數的細胞系可以被認為是*適應后100% SFM 3通道。有時你可能會得到你過去的某一步甚至細胞之前一百% SFM有麻煩。如果發生這種情況,回去和傳代細胞2–3次血清前比補充媒體的無血清培養基。
三、對無血清培養的思考
總的來說,在無血清培養細胞的滲透壓,pH,溫度,機械力ji端敏感,酶處理。
1.抗生素
不要在無血清培養基中使用抗生素。如果你這樣做,我們建議您使用5到10倍不到你會在血清培養基中。這是因為血清蛋白會結合一定量的抗生素添加;沒有這些血清蛋白抗生素的水平可能是某些細胞的毒性。
2.高密度
細胞必須與活力> 90%適應中的生長對數期。連續的適應可能是必要的。播種文化在一個更高的密度比正常在各通道在SFM適應可以幫助過程。因為有些部分的細胞不可能在新的文化環境中生存,有更多的細胞會增加活細胞數進一步通道。
3.叢生
細胞聚集往往發生在適應SFM。我們建議你輕輕地成團塊打破他們當傳代細胞。
4.形態
這是不尋常的在適應SFM后見細胞形態略有變化。只要倍增時間和細胞活性保持良好,在形態上的細微變化,不應該是一個值得關注的理由。
四、對培養的適應
為適應SFM的另一種方法涉及使用“條件培養基"。介質的細胞已生長在一個完整的通道,如果您選擇這種方法,可以促進適應如下:
通道1,100%血清的培養基
通道2通道50%中從1:50左右SFM
通道3通道50%中從2:50左右SFM