微生物實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)皿、三角瓶、吸管、試管、過(guò)濾器必須*滅菌，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

一、實(shí)驗(yàn)用品的滅菌

1.高壓蒸氣滅菌。高壓蒸氣滅菌用121℃蒸氣壓力滅菌20-30min即可。高壓蒸氣滅菌后， 玻璃器皿上常常帶有水珠，可再用烘箱烘干。

2.干熱滅菌干熱滅菌用烘箱。通常于150-160℃滅菌2小時(shí)。溫度不可過(guò)高，超過(guò)180℃時(shí)棉塞和紙張易烤焦起火。器皿放入烘箱之前必須是干燥的，以免引起玻璃的破碎。器皿在烘箱內(nèi)不宜過(guò)滿，應(yīng)留有一定的空隙。溫度應(yīng)從室溫逐漸升至所需溫度。結(jié)束后也應(yīng)逐步降溫直至低于60℃時(shí)才可開門取出滅菌的器皿，否則玻璃可能因突然遇冷而破碎。

二、培養(yǎng)基的滅菌

培養(yǎng)基的滅菌可用濕熱滅菌或過(guò)濾滅菌。濕熱滅菌有高壓蒸氣滅菌和常壓蒸氣滅菌兩種。

（1）高壓蒸氣滅菌在高壓蒸氣滅菌器中進(jìn)行，利用提高蒸氣壓力而使溫度增高的作用，因而提高了蒸氣滅菌效力。蒸氣壓力和溫度關(guān)系見(jiàn)表11-2。
 

上表所列的溫度是飽和蒸氣壓力下的溫度。但如高壓蒸氣滅菌器中的空氣未排凈，那么實(shí)際溫度就達(dá)不到應(yīng)有的溫度。例如，*不排除滅菌器中的空氣，當(dāng)表壓為1kg/cm2，實(shí)際溫度僅為100℃；如排除滅菌器中1/2的空氣，當(dāng)表壓為1kg/cm2氣實(shí)際溫度僅為112℃。因此使用高壓蒸氣滅菌時(shí)務(wù)必將其中空氣全部排除，才能達(dá)到預(yù)期效果。一般培養(yǎng)基滅菌時(shí)大多使用1kg/cm2，15～20·min。如滅菌器中裝填較滿、培養(yǎng)基裝量較大(1L以上）或培養(yǎng)基污染雜菌較多（如蚨皮）時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間達(dá)30min。個(gè)別情況下可用1 kg/cm2以上的蒸氣壓力滅菌。培養(yǎng)基中如含有高溫時(shí)易分解破壞的物質(zhì)（如某些含糖培養(yǎng)基），可采用較低的壓力，如0.6～0.8kg/cm2。配制這種培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量減少雜菌污染。所用的試管或三角瓶及其棉塞應(yīng)先行滅菌。培養(yǎng)基中其他的耐熱成分也可先行高壓滅菌。加入不太耐熱組分，分裝后再用較低壓力滅菌。

（2）常壓蒸氣滅菌也稱作間歇蒸氣滅菌，用于在100℃以上易千破壞的培養(yǎng)基的滅菌，如牛奶、明膠等。常壓蒸氣滅菌也就是用蒸氣蒸。在滅菌器中溫度升到100℃時(shí)，在不加壓力的情況下使水保持沸騰，即保持lOO℃30 min。取出滅菌的培養(yǎng)基，放室溫或保溫箱中。第二、三日連續(xù)如上法于100℃各滅菌30min即可。細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)體可在可在第二日的100℃30min殺死。第三日再將少數(shù)殘留的細(xì)菌殺死，這樣可達(dá)到*滅菌的目的。

（3）過(guò)濾滅菌用于不能用熱滅菌的培養(yǎng)基， 如某些易破壞或易揮發(fā)的物質(zhì)。常用的除去細(xì)菌的過(guò)濾器有賽氏過(guò)濾器和微孔膜過(guò)濾器。這兩種過(guò)濾器的形式大致相同，只是過(guò)濾板不同。過(guò)濾細(xì)菌用的賽氏過(guò)濾器的規(guī)格為EK,微孔膜的規(guī)格為0.22～0.45μm。使用前，將過(guò)濾器連同吸濾瓶等按無(wú)菌操作的要求裝好，用紗布包好，高壓蒸氣滅菌。使用時(shí)用真空泵抽氣吸濾，不可將漏斗中的液體抽干。使用過(guò)的濾板需棄去。有的微量物質(zhì)，如指示劑顏色等可能被濾板吸附，從培養(yǎng)基中損失掉。賽氏過(guò)濾板尤其易吸附微量物質(zhì)，使用時(shí)應(yīng)注意。