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蛋白提取操作時應注意的細節!!!
點擊次數:768 更新時間:2020-07-08

避免蛋白降解:

總體規則:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白質的步驟中,早些抑制,經常抑制

分裝蛋白溶液,儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中,測蛋白活性,找出適儲存條件。

冷藏,并加入穩定劑。這些穩定劑一般都能充分保持蛋白的生物學活性。

將蛋白溶液儲于50%(V/V)的甘油或懸于硫酸銨(3.2M)中,避免凍存

冰結晶會造成物理剪切及蛋白變性。

避免酶的反復凍融,如果酶需要凍存,分裝成小管后凍存。

蛋白質的儲存:

蛋白樣品在液氮中速凍,拿出后加入10-20%的甘油,長期儲存

整個實驗過程中,都要將蛋白樣品置于冰上

從母管中吸取不同的蛋白時,都要用新鮮的槍頭

不要將未用的溶液倒回母管

戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染

避免劇烈的震蕩,避免溶液中混入蛋白變性劑

實驗的過程中應避免灰塵進入,灰塵包含60%的肌氨酸

操作過程中:

操作時總是小體積小量的操作,避免污染,并且動作要快

a:此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。

b:此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸(巰基,-SH-)。

c:此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子(如:n2+,Ca2+,Mn2+)。

d:此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。


生物試劑的使用常識:
(1)試劑切忌與手接觸(有些試劑有強腐蝕性、等特性)。
(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,不允許用同一種工具同時連續取用多種試劑。取完一種試劑后,應將工具洗凈(藥勺要擦干)后,才可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后請及時將瓶放回原處,以免遺忘,帶來不便。
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(怕產生原試劑的再次污染)。

 

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