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全血細胞培養染色體技術常用試劑配制
點擊次數:557 更新時間:2020-07-07

一、國內實驗室應用試劑配制
(一)培養液
(1)RPMI1640培養液:稱取RPMI培養基9.8g,碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml,加雙蒸水至1000ml,調節 pH7.2~7.4無菌過濾凍存備用。
(2)小牛血清商品:成都生物制品廠。
(3)植物凝集素(PHA):自制或成品(重慶藥檢所)。
(4)pH調整液:5% NaHCO3溶液高壓滅菌(8磅15min),0.1N稀鹽酸液100ml。
(5)秋水仙素:10mg/ml無菌過濾高壓滅菌(8磅10min)。
(6)磷酸緩沖液:pH7.4。
磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸-二氫鉀2.67g(無水),溶于1000ml雙蒸水中,加肝素,終濃度為100u/ml。

(7)Giemsa染色液:
Giemsa粉劑 1g
甘油 66ml
在研缽中,加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨,60℃溫箱中保溫2h,冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍,隨配隨用。

 

(二)固定液
(1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。
(2)PBS緩沖液配制:
NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g
KCl 0.4g KH2PO4 0.4g
加雙蒸水至1000ml pH7.0。
取5%胰酶(生理鹽水配制)1ml加入50ml PBS液中(終濃度為0.025%),4℃冰箱待用。

二、細胞培養(Bhatl B和McGee JOD,1990)
1.*培養基
RPMI 76.0ml
胎牛血清 20.0ml
植物凝集素 2.0ml
抗生素/抗菌素溶液(100)

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