經常有用戶反映“細胞凍存與復蘇遇到了問題”,“如何握住原力,讓你的細胞乖乖沉睡又滿血復活?”
遠慕生物為此做了以下總結:
選 好 細 胞 凍 存 液 是 基 礎
使用動物血清常常會遇到很多問題,例如:病毒感染、其他動物源的污染。使用無血清制品培養與凍存細胞,可以消除這方面的隱患。此外,無血清凍存液可以確保細胞在化學成分固定的條件下生長,更進一步確保細胞凍存時的條件穩定。
慢 慢 做 冷 凍
若您養的是貼壁細胞,請先將細胞消化下來;若是懸浮細胞,請直接按以下步驟進行:
1. 以200-300g離心3分鐘,棄去上清,收集細胞。
2. 用BI無血清凍存液將細胞重懸(不需回溫),將細胞密度調整為3~5x106 cells/ml,添加到凍存管中(一般每管1ml)。
3. 建議將含有細胞懸液的凍存管放進漸進降溫盒或是保溫杯中,置于-80°C冰箱6小時以上或是過夜(或不需要程序降溫)。
4. 將凍存管迅速移到液態氮中保存。
5. 凍存24小時后,建議檢測細胞存活率。
細 胞 復 蘇 要 迅 速
1. 將細胞凍存管由液態氮中取出,置于室溫回溫,不用水浴溶解。此時可準備新鮮培養 基、無菌15ml離心管、培養瓶。
2. 在生物安全柜內,直接以少量培養基反復沖融,使細胞團塊化凍。
3. 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養基,再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g,3分鐘離心收集細胞。
4. 倒去上清液,重懸細胞,移到培養瓶中培養。
BI無血清細胞凍存液
不含動物成份
細胞凍存與復蘇后,平均活細胞回收比例超過90%
Serum-Free Cell Freezing Medium
無血清細胞凍存液,無血清培養的細胞應該使用無血清的凍存液保存,以保持無血清培養體系的完整。本凍存液不含蛋白及動物組分,主要成分為DMSO和甲基纖維素。
Cryostem ACF Freezing Media
無血清干細胞凍存液(Optimized for Stem Cell),CryoStem對所有種類的細胞都有非常好的凍存效果,該產品經過驗證,特別適用于人胚胎干細胞和人原代細胞的凍存。用CryoStem凍存融解后,細胞表現出ji佳的復蘇率、生長活性、貼壁性和傳代能力。
MSC Freezing Medium
無血清間充質干細胞凍存液,即用型溶液,特別適用于人類間充質干細胞凍存,用MSC凍存液凍存融解后,細胞表現出ji佳的復蘇率、生長活性。