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細(xì)胞有了支原體怎么辦? @遠(yuǎn)慕新聞
點(diǎn)擊次數(shù):603 更新時(shí)間:2020-04-20

    平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染(65~80%嚴(yán)重污染),超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染;而各地的細(xì)胞庫中,也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率,日本甚至高達(dá)60%。

    但!目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%!

    支原體為細(xì)菌的一類,zui早在1898年由法國 E. Nocard 及 E.R.Roux 從肺疫牛隻中分離出來,1956年才正式命名為支原體 (Mycoplasma);支原體大小介于細(xì)菌與病毒之間 (直徑介于0.15-0.3?m),為目前發(fā)現(xiàn)zui小zui簡單的原核微生物,唯1可見的胞器是核糖體,沒有細(xì)胞壁,只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜,所以呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀,分枝狀等多種態(tài) 。

    大多支原體基因組只有0.58-1.38百萬堿基,這使得它的生物合成能力薄弱,必須利用本身細(xì)胞膜表面高密度的黏附素附著于宿主細(xì)胞表面,并交換宿主的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜成分,來獲取增殖需要的物質(zhì)。但由于支原體生長條件復(fù)雜,使得菌體培養(yǎng)困難重重,導(dǎo)致過去支原體一直不受關(guān)注;近幾年,拜分子生物學(xué)與基因組學(xué)的進(jìn)步所賜,基因構(gòu)造簡單的支原體已引起了較為廣大注意。

 


    至今,共有超過180種支原體被發(fā)現(xiàn),有超過20種能感染體外培養(yǎng)的細(xì)胞,而目前實(shí)驗(yàn)室zui常見(95% 以上)的支原體則來自其中6種:

    源自于實(shí)驗(yàn)人員鼻腔、口腔,并經(jīng)由飛沫傳至培養(yǎng)細(xì)胞中的口腔支原體(M.orale)、豬鼻支原體(M.fermentans)及人型支原體(M.hominis),居于*(占總體的50%以上)。

    其次則為大多來自牛血清的精氨酸支原體(M. Arginini)、萊氏無膽甾支原體(A. Laidlawii)、及來自豬源胰酶的豬鼻支原體(M. Hyorhinis)。

    PS:BI胰酶經(jīng)過輻照,不含活的支原體。

    既然支原體是細(xì)菌的一種,抗生素一加不就好了嗎?

    為什么可以搞到這么多細(xì)胞庫污染?

    支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無法觀察到。

    支原體能附著并存活在器物表面(操作臺(tái), 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。

    支原體生長緩慢,通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長代謝,且對(duì)傳統(tǒng)抗生素具抗性,因?yàn)榭股卮蠖嗥茐募?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒有細(xì)胞壁。

    支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常,但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。

    你說,支原體煩不煩!

    目前檢測(cè)方法可大致分成四種:

    ■微生物培養(yǎng)法

    將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上,在37?C有氧環(huán)境中孵育2周,陽性培養(yǎng)基上會(huì)長出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。

    ■DNA螢光染色法

    支原體DNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%),容易被Hoechst 33258此熒光劑染上,被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后,在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。

    ■ELISA法

    將支原體16S核糖體RNA標(biāo)上標(biāo)簽,然后用特定抗體預(yù)包被過的微孔板對(duì)標(biāo)簽進(jìn)行捕獲,再加入顯色用的抗體及底物,zui后通過比色法得出檢測(cè)結(jié)果。

    ■PCR法

    原理為擴(kuò)增支原體16S核糖體RNA的基因,能檢測(cè)多達(dá)19種支原體,操作快速、準(zhǔn)確性高,市面上有多款相關(guān)產(chǎn)品可參考

    消滅支原體依不同處理發(fā)法,分成四大類:

    ■物理法:高溫高壓滅菌

    ■免疫法:使用支原體特異性抗血清、裸鼠傳代法

    ■化學(xué)法:界面活性劑處理(BI:Pharmacidal 支原體噴壺)

    ■生化法:使用抗生素等藥物(BI:BIOMYC 支原體處理試劑)

    目前,大環(huán)內(nèi)酯(Macrolides)、四環(huán)素(Tetracyclines)和喹諾酮(Quinolones)這三類抗生素,是*對(duì)抗支原體效果*的藥物,而市面上有許多針對(duì)不同菌株配置的抗生素產(chǎn)品可以參考。

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