年初《Nature》雜志展望 2018 年生物醫學技術突破,作為「technology to watch in 2018」——質譜流式細胞技術(CyTOF),很多國內外大咖已經聚焦這項技術。質譜流式技術(CyTOF)可以對數百萬細胞進行超過 40 個參數的單細胞分析,讓研究更加全面、深入。
質譜流式
與傳統流式技術相比,質譜流式采用非放射性的穩定重金屬同位素作為抗體的標簽,達到同時測量單細胞中多個靶點的目標,高純度金屬同位素確保了低的背景以及小的信號重疊。
質譜流式原理
質譜流式技術需要用到金屬偶聯標記的抗體。抗體質量,尤其是特異性是后續實驗成功的關鍵。使用經過嚴格標準驗證的抗體,能大大提高實驗成功率。
質譜免疫組化
基于 CyTOF 技術,質譜流式成像技術 Imaging Mass Cytometry™ 將質譜流式(CyTOF)超高檢測通道數量的優勢在組織成像研究中大化,其性能遠遠超越了傳統的免疫組化或者免疫熒光技術。目前通過單次掃描即可獲得組織切片樣本上 4-37 種蛋白標記物的圖像數據,準確反映了蛋白及對應的細胞在組織微環境中的表型和相互關系等多方面綜合全面的信息,特別是針對一些珍貴的 FFPE 樣本或冰凍組織切片,可以在亞細胞水平進行更深入的分析。
1、這么牛的技術對抗體有什么要求嗎?
一般而言,常規的一抗,儲存液中都包含BSA、甘油、等可能會干擾部分偶聯標記化學反應的成分。這些干擾成分在常規的無需對抗體進行改造的實驗中能提高抗體的穩定性、降低移液損失和冰凍造成的效價降低。但是在抗體偶聯標記類實驗(包含金屬標記反應)中可能會造成標記效率降低的問題。所以,CyTOF 需要無載體緩沖液的抗體形式,不包含 BSA、甘油、疊氮鈉等可能干擾重金屬標記反應的抗體緩沖液。
2、CST 是否可以提供 CyTOF 定制抗體?
CST 可以提供這種定制形式的抗體可直接儲存在 PBS 緩沖液中,并且可以定制成更高抗體濃度(部分可能以 >1 mg/ml 濃度提供)的產品,便于后續進行偶聯標記反應。
3、如何提高 CST 的抗體做 CyTOF 的成功率?
雖然目前質譜流式技術不在 CST 標準內部應用驗證流程中,如果您遵循以下建議,很有可能提高該實驗的成功率。
若采用 Helios™ 平臺進行實驗,可優先考慮從 CST 的 Flow 驗證過的抗體目錄中進行選擇。
若采用 Imaging Mass Cytometry™ 平臺,您選擇的抗體應與樣品制備方法相匹配。對于石蠟切片樣品,可優先考慮從 CST 的 IHC-P 或 IF-P 應用驗證的抗體目錄中進行選擇。對于冷凍組織切片,可優先考慮從 CST 的 IF-F 或 IHC-F 應用驗證的抗體目錄中進行選擇。