分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們?cè)诜治錾V上取得了良好的分離效果時(shí),可以將其放大,應(yīng)用到制備色譜上,由此,我們需要考慮調(diào)整上樣量,流速,梯度:
1、上樣量的調(diào)整:他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長(zhǎng)和柱內(nèi)徑有關(guān):具體關(guān)系時(shí);制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長(zhǎng)/分析柱長(zhǎng)*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方;
2、流速的調(diào)整:制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長(zhǎng)/分析柱長(zhǎng)×制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方;
3、梯度的調(diào)整:制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積×制備柱流速/分析柱流速;
制備色譜與分析色譜有啥關(guān)系?
很多初接觸色譜領(lǐng)域的朋友對(duì)制備色譜這個(gè)名詞比較陌生。其實(shí),在化學(xué)化工醫(yī)藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是zui為典型的制備色譜,換句話說,將分析色譜的進(jìn)樣量增大,同時(shí)得出大量的所需物質(zhì)(餾分)的過程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。而制備色譜系統(tǒng)則是利用制備色譜的思想能得到純化物質(zhì)的多個(gè)分析測(cè)試設(shè)備聯(lián)用的總稱。
制備色譜能當(dāng)分析色譜用嗎?
目前,很多客戶的要求都傾向于買一臺(tái)液相能同時(shí)解決制備和分析的所有問題,那就相當(dāng)OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費(fèi)緊張,好不容易批下來點(diǎn)錢,不想都花在后期純化和分析上,所以二合一。其實(shí),分析液相和制備液相是通用的,只是精度的差別問題。比如,分析的液相一般流速在0.1~10mL/min,活塞的一個(gè)沖程大概是10μL,而普通的制備液相一般都是10~100mL的流速,因此活塞桿的尺寸也會(huì)變大,一個(gè)沖程差不多是100μL;流速的精度相對(duì)來說就差了很多。流速大了,管路也相應(yīng)的粗了不少,以降低高流速帶來的背景壓力;但這樣的儀器用于分析的話,柱后的擴(kuò)散現(xiàn)象相當(dāng)?shù)膮柡Γ词乖谏V柱上達(dá)到基線分離的兩個(gè)峰,由于柱后擴(kuò)散的作用,到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)候,差不多又會(huì)合到一起了;另外就是檢測(cè)器的差異,主要是檢測(cè)池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20,以保證大量進(jìn)樣后,不會(huì)超過量程太多而平頭,分不清到底分沒分開了。倒是有個(gè)折中的辦法,就是買分析型的液相,然后接個(gè)半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子,流速5mL以內(nèi),因此這個(gè)分析液相能達(dá)到;進(jìn)樣量大約是分析柱的10~20倍,檢測(cè)器可能會(huì)平頭,沒關(guān)系,換個(gè)波長(zhǎng),找個(gè)吸收較弱的波長(zhǎng)當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)就OK了,不是大量制備的話,應(yīng)該基本可以滿足需要了。
分析色譜,制備色譜與工業(yè)色譜的主要區(qū)別。
1、分析色譜:在乎分析結(jié)果,對(duì)化驗(yàn)結(jié)果的純度,比例等要求準(zhǔn)確,而對(duì)收率,濃度等產(chǎn)品參數(shù)不在乎,一次進(jìn)料,而且每次進(jìn)料少。
2、工業(yè)色譜:比較在乎產(chǎn)品的濃度和收率,還有純度,工業(yè)化生產(chǎn)是連續(xù)進(jìn)料。
3、制備色譜:介于兩者之間,一般用于做單柱試驗(yàn)。
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