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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

測定血清白蛋白的測定法是溴甲酚紫法
點(diǎn)擊次數(shù):1955 更新時間:2017-04-24

血清白蛋白,即Serum albumin,??s寫為ALB。血清白蛋白合成于肝臟,是脊椎動物血漿中含量zui豐富的蛋白質(zhì)。不同來源的血清白蛋白的氨基酸序列及其空間結(jié)構(gòu)非常保守,它具有結(jié)合和運(yùn)輸內(nèi)源性與外源性物質(zhì)的性質(zhì),維持血液膠體滲透壓,清除自由基,抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能。在生命過程中有著重要的意義。

在測定時使用什么方法是效的呢?不如我們來試試溴甲酚紫法!

溴甲酚紫法是由國外推出而引進(jìn)中國的,此方法主要就是用來測定血清白蛋白,首先我們從材料講起!

a,儀器與試劑 DADE BEHRING Dimension RXL型與Dimension RXL密閉ALB試劑(批號EJ2235);OLYMPUS AU800型全自動生化分析儀、日本W(wǎng)AKO ALB試劑(批號DJ326)。ALB標(biāo)準(zhǔn)品 采用Dimension TP/ALB Calibrator(批號1GD024)和Olympus System Calibrator(批號105E);質(zhì)控品采用美國DADE Moni-Trol Chemistry Control(批號EM2-0312)。

b,原理 在pH4.9醋酸鹽緩沖液中,溴甲酚紫與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物,在600nm波長處的吸光度與白蛋白濃度成正比,與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較,可計(jì)算樣品血清中的白蛋白濃度。 


c,方法 取Dimension TP/ALB Calibrator的中間水平42g/L作標(biāo)準(zhǔn),以兩管去離子水作為0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)對RXL進(jìn)行假三點(diǎn)定標(biāo),隨后測定83 g/L、72.63 g/L、62.25g/L、55.33g/L、42g/L 28g/L、21g/L、14g/L、10.5g/L、5.0g/L共十個濃度的ALB標(biāo)準(zhǔn)溶液及其吸光度,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線;收集30ml新鮮混合血清用Dimension RXL進(jìn)行批內(nèi)和批間精密度試驗(yàn)。另收集100份門診就診者血清,用System Calibrator對AU800的ALB進(jìn)行定標(biāo)后,兩臺生化分析儀同時進(jìn)行ALB檢測。

2結(jié)果
a,標(biāo)準(zhǔn)曲線 用RXL全自動生化分析儀檢測上述十個不同濃度的ALB標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度,以ALB濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),繪制校正曲線。結(jié)果表明ALB濃度在5.0~83g/L之間,線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為1.000,回歸方程式:y=0.234X-11.588。
b,精密度 收集30ml新鮮混合血清(無明顯溶血、脂血、黃疸者),分成60份,取30份上RXL連續(xù)分析,求得 =42.76g/L,SD=0.418,批內(nèi)變異系數(shù)為0.95%;另30份混合血清樣品置-20℃冰箱冷凍保存,每日早晚各測定一次,共計(jì)15d ,測得其 =41.92g/L,SD=1.27,批間變異系數(shù)為3.03%。
c,回收率 取一份新鮮血清分裝為4管,每管900μl,RXL測定其中1管ALB濃度為39.70g/L,另3管分別加入14g/L、42g/L、83g/L的ALB標(biāo)準(zhǔn)液100μl,測得回收濃度分別為1.36 g/L、4.30 g/L和8.20 g/L,回收率分別為97.1%、102.4%和98.8%,平均回收率為99.4%。
d,干擾試驗(yàn) 取一份新鮮血清,測定其ALB為41.2g/L。將膽紅素純品配成378μmol/L的溶液,將血清樣品與膽紅素溶液按9:1、2:1、1:1、1:2的比例進(jìn)行混合,然后測定ALB含量。結(jié)果表明,252μmol/L的膽紅素對BCP法測定ALB無影響。血清樣品與20%的Trilitid按6:1、4:1、3:1混合,結(jié)果顯示,Trilitid濃度為2.9%和4.0%時對測定結(jié)果無明顯影響,濃度達(dá)5%時會產(chǎn)生7.76%的正干擾。溶血標(biāo)本血紅蛋白≤4.0g/L時對測定無明顯干擾。
e,顯色穩(wěn)定性 ALB可與BCP進(jìn)行即時*反應(yīng),不受時間和溫度變化的影響,反應(yīng)后吸光度可穩(wěn)定1h以上。
f,方法對比試驗(yàn) 用本法(X)和BCG法(Y)分別測定100份門診就診者血清ALB,經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理,其回歸方程為y=1.08x+5.98,r=0.929,經(jīng)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)其F=364.84,P<0.001,兩種方法測定結(jié)果顯著相關(guān)。將兩種方法測定100份樣品的結(jié)果進(jìn)行配對t檢驗(yàn),t=38.29,P<0.001,兩種方法測定的結(jié)果有顯著性差異。但將BCP法的測定結(jié)果經(jīng)回歸方程換算后,兩法結(jié)果非常接近。
g,正常參考值 用BCP法測定120名健康成人血清ALB含量,其中男性65例,女性55例,年齡18~50歲,結(jié)果( ±s)為(41.5±3.75)g/L,參考值范圍( ±2s):34~49g/L。與國外人群的參考值范圍35~50g/L相近。
3討論
傳統(tǒng)的溴甲酚綠法測定血清白蛋白會受到非白蛋白類蛋白質(zhì)的非特異性干擾,而BCP試劑的zui適pH值為5.20,接近a-和b-球蛋白的等電點(diǎn),能抑制這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應(yīng),因此對測定白蛋白具有更高的特異性。本試驗(yàn)的結(jié)果表明,BCP法測定血清ALB的精密度較好,回收率高,線性范圍可達(dá)10~80g/L,比傳統(tǒng)的BCG法更寬,而且不易受溶血、黃疸和脂血等臨床常見干擾因素的干擾。
BCP和BCG這兩種方法測定ALB結(jié)果的差異,不同的研究者對不同人群檢測的結(jié)果不盡相同。Blagg等認(rèn)為,采用溴甲酚綠長反應(yīng)時間測定法檢測健康人血清白蛋白的差值可比溴甲酚紫法高11g/L。與標(biāo)準(zhǔn)的電免疫測定法(eletroimnunoassay)相比,采用BCG短反應(yīng)時間法測定的非shenbing病人血清ALB會偏高7g/L,shenbing病人則偏高8g/L。Joseph則認(rèn)為,BCG法測定ALB與散射比濁法的結(jié)果較一致,而BCP法比BCG法測定結(jié)果偏低5.2g/L;行血液透析的病人比腹膜透析者偏低更嚴(yán)重。Clase等則認(rèn)為BCP法測定shenbing與非選擇性患者、血液透析與其他shenbing患者血清ALB的表現(xiàn)一致,比BCG法約偏低5.5g/L,這一觀點(diǎn)與Joseph相反。Blagg等的研究表明,BCP法比BCG法偏低5g/L。zui近,Carfray認(rèn)為,BCP法測定血透病人ALB的結(jié)果與"金標(biāo)準(zhǔn)"的散射比濁法結(jié)果更接近,BCG法測定ALB結(jié)果偏高(尤其是高白蛋白血癥患者偏高更為顯著),通常比BCP高3.5g/L。
因?yàn)槿狈晒┍容^的"金標(biāo)準(zhǔn)",本試驗(yàn)的結(jié)果并不能說明BCG的結(jié)果偏高、BCP結(jié)果偏低,抑或兩者皆有。國外學(xué)者的觀點(diǎn)也不盡相同,Joseph等認(rèn)為BCG法更接近"金標(biāo)準(zhǔn)",而Blagg、Carfray等卻認(rèn)為BCP法更佳,這也許與各自所采用的標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。在短時間內(nèi),大家不可能接受單一的測定ALB的方法為zui終標(biāo)準(zhǔn)方法,更不可能在臨床上都應(yīng)用那一種方法。這兩種方法在臨床上都廣為應(yīng)用,盡管有人提出放棄BCG法,但這種觀點(diǎn)并未被普遍接受,BCP法的人源質(zhì)控血清和技術(shù)轉(zhuǎn)換在一定時間內(nèi)仍存在一定的困難。因此,BCP和BCG這兩種測定ALB的方法在相當(dāng)一段時間內(nèi)仍將共存。
本試驗(yàn)的目的不是幫助選擇哪一種更好的方法,而是為了解決臨床和科研工作中的一個實(shí)際問題,即如何比較分析不同方法測得的ALB結(jié)果。我們的試驗(yàn)結(jié)果表明,用BCP和BCG兩種方法測定100份門診患者血清ALB的結(jié)果有顯著性差異(P<0.001),但高度相關(guān)(r=0.929)。BCP法比BCG法低5.98g/L(以BCG法為Y,BCP法為X,兩法測定結(jié)果的回歸方程為y=1.08x+5.98),與上述多位國外研究者的結(jié)果非常相近。將近年來推出的BCP法的測定結(jié)果按y=1.08x+6作一個簡單換算,即可預(yù)測BCG法的測定結(jié)果,效果非常令人滿意。
 

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