大鼠血管緊張素轉化酶 -2(ACE-2)ELISA 試劑盒
( 用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內 )
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 ACE-2 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 ACE-2 與單抗結合,加入生物素化的抗大鼠 ACE-2 ,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的 Streptavidin 與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,zui后加終止液硫酸,在 450nm 處測 OD 值, ACE-2 濃度與 OD 值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中 ACE-2 濃度。
試劑盒組成 ( 2-8℃ 保存)
準備試劑與收集血樣
1.收集標本:血清、血漿( EDTA 、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存 48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃ 或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2.標準品液配制:使用前加入 1ml 蒸餾水 混勻,配成 250ng/ml 的溶液 。 設標準管 8 管,*管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在*管中加入 250ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出 500ul 棄去。第八管為空白對照。
3.10 ×標本稀釋液用蒸餾水作 1:10 倍稀釋( 示例: 1ml 濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4.洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例: 1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序
1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3.每孔中加入*抗體工作液 100ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 60 分鐘。
4.洗板:同前。
5.每孔加酶標抗體工作液 100ul 。將反應板置 37 ℃ 30 分鐘。
6.洗板:同前。
7.每孔加入底物工作液 100ul ,置 37 ℃ 暗處反應 15 分鐘。
8.每孔加入 100ul 終止液混勻。
9.30 分鐘內用酶標儀在 45 0nm 處測 吸光值。
結果計算與判斷
1.所有 OD 值都應減除空白值后再行計算。
2.以標準品 25 、 12.5 、 6.25 、 3.12 、 1.56 、 0.78 、 0.39 、 0 ng/ml 為橫坐標, OD 值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3.根據樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應 ACE-2 含量 即可 。
試劑盒性能
1. 靈敏度 : zui小的 ACE-2 檢測濃度小于 0.2ng/ml 。
2.特異性: 可同時檢測重組或天然的大鼠 ACE-2 。 不與 大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3.重復性:板內、板見變異系數均小于10 %。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程 很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及 OD 值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持 板條干燥 。
4. 本試劑盒宜置 4o C 冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!