原代細胞:從體內直接分離的細胞。功能、代謝、形態類似體內細胞的特點,因此原代細胞適用于分析單個細胞形態、代謝、功能。原代細胞的缺點是:細胞均一性差,因為從特定組織取下來的原代細胞可能處于不同的發育時期。增殖能力差、培養時間受限、轉染效率低。
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養法
③ 懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
④器官培養
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。
細胞株:細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經首ci傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代,或傳代次數有限, 可稱為有限細胞系(finite cell line), 如可以連續培養, 則稱為連續細胞系(continuous cell line), 培養50代以上并無限培養下去。 所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。
原代細胞由于轉染效率低這個問題,應用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因為其chao強的感染能力,克服了原代細胞難感染的問題,使得原代細胞的使用變得更加簡單。由于細胞實驗后,很多時候需要做到動物體內,由于原代細胞有體內細胞的特點,為了細胞實驗和動物體內實驗的結果更加趨向一致性,因此用原代細胞來進行細胞實驗更值得考慮。