影響標本固定的因素很多,如組織與固定液的比例、固定時間、固定溫度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所選固定液不當,細胞內蛋白質、脂類、核 酸等成 分將會有不同程度地損失。固定劑最好隨配隨用,并注意其濃度和酸堿度。因此根據實際工作的目的,選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及適用范圍。
1.單純固定液
(1)4%中性甲醛固定液:最chang用的固定液,能滿足常規HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標本均適用。尤其值得注意的是,中性甲 醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應密封并保存在陰涼處,保存時間不 超過一個月。
甲醛(40%) 100 ml
無水磷酸氫2鈉 6.5 g
磷酸2氫鈉 4.0g
蒸餾水 900 ml
(2)乙醇固定液:使用時以80%~95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對組織滲透力較弱,因此很少單獨使用,但其保存組織中的核酸強于中性甲醛,故常用于有核酸操作的實驗或檢查,如果用于證明尿酸結晶和保存糖原,可用100%乙醇固定組織。
(3)4%的多聚甲醛:主要用于培養細胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標本可直接入95%乙醇脫水。
甲醛(40%) 100 ml
95%乙醇 900 ml
(2)B5(醋酸鈉一升gong一甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織。染色前應進行脫gong沉淀處理。
無水醋酸鈉 1.25 g
升gong 6.0 g
蒸餾水 90 ml
使用前加入甲醛 10 ml
(3)Bouin固定液:特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻,收縮很少,不會使組織變硬變脆。需現配現用。
飽和ku味酸水溶液(約1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰cu酸 5 ml
(4)Carnoy固定液:穿透能力強,可很好的固定細胞質和細胞核,特別適合于固定外膜致密的組織,亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
無水乙醇 60 ml
lv仿 30 ml
冰cu酸 10 ml
(5)Zenker固定液:經此液固定的標本,細胞核和細胞質染色頗為清晰,但成本較昂貴且需特殊處理gong。該固定液要避免接觸陽光,以免引起化學變化而失效。
升gong 5.0 g
重鉻酸鉀 2.5 g
硫酸鈉 1.0g
蒸餾水(加至) 100 ml