NaCl在培養基中的作用
鈉離子不參與細胞的組成,但仍是微生物發酵培養基的必要成分,鈉離子與維持細胞滲透壓有關,故在培養基中常加入少量的鈉鹽,但用量不能過高,否則會影響微生物的生長。
氯離子在一般微生物中不具有營養作用,但對一些嗜鹽菌來講是需要的,在一些產生含氯代謝物的發酵中,除了從其他天然原料和水中帶入的氯離子外,還需加入一定量的氯化物補充氯離子。
實驗證明,在無機大量元素中,NaCl與維持細胞內外滲透壓平衡,K2HPO4在培養基起緩沖劑調節pH值的作用,用量不能過高,否則會影響微生物的生長,一般用量在5%以內。
在固體培養基培養時,其實也是這個道理,細菌在利用基質時能同時吸收NaCl,在體內也能起到類似的作用即維持滲透壓的作用。
特別是有的嗜鹽菌,需要達到一定的鹽濃度才能激活體內的某些酶才能生長正常的。
培養基的配制:
1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3、調PH:用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。
4、過濾:濾紙或棉花進行過濾。
5、分裝:一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養,則100ml培養基/250ml的三角瓶,最多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15-20ml培養基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。
固體斜面培養基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。
8、擺斜面:滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。
9、貯存:培養基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。