瓊脂糖凝膠電泳儀是以瓊脂糖凝膠作為載體的電泳,廣泛用于核酸研究。瓊脂糖凝膠屬于大孔膠,可分析分子量為107的大分子,這種大孔特性有利于免疫電泳和微量制備。
瓊脂糖形成凝膠后孔徑的大小取決于瓊脂糖凝膠濃度,瓊脂糖凝膠濃度與平均孔徑的關系如下:
一、瓊脂糖凝膠濃度為0.075%時,平均孔徑為800nm。
二、瓊脂糖凝膠濃度為0.16%時,平均孔徑為500nm。
三、瓊脂糖凝膠濃度為1%時,平均孔徑為150nm。
四、瓊脂糖凝膠濃度為2%時,平均孔徑為20nm。
瓊脂糖凝膠的濃度選擇:
目的產物大小80BP的片段,你可以用2.0%的瓊脂糖凝膠進行電泳,瓊脂糖以及TAE的量的多少,首先與你跑得樣品的個數有關,因為你樣品的個數決定了你膠槽的體積,膠槽的體積決定了你的TAE的量,決定了瓊脂糖的量,比如說你膠槽的體積是20ml, 那么你要配2.0%的膠,就需要20ml的TAE和0.4g的瓊脂糖。
做膠的時候要注意一定要讓瓊脂糖充分溶解,可以煮沸,同時也要注意煮沸的過程中TAE的蒸發,我第一次做膠的時候,用燒瓶煮沸差點都蒸發光了;再就是加EB的時候以不燙手為標準,因為高于70度時EB會升華蒸發,過于冷卻了會使EB的濃度不均;因為EB為致癌物質,所以操作時一定要注意做好自我保護;再就是膠槽要洗干凈,梳齒一定要放正,免得跑出來的帶不整齊。
跑膠的時間和電壓成反比,電壓和電泳槽兩個電極之間的距離成正比,一般是小于5V/cm. 因為你的片段很小,所以很有可能和引物二聚體無法區分,所以你再跑電泳時時間應該適當延長一些,可以使溴芬蘭指示條帶跑過膠的2/3處,因為時間長了,因物二聚體就會跑沒了,而目的產物不會。