生物su,是一個分子量只有244.31Da的小分子,經活化后可與蛋白、抗體等生物大分子結合,不僅可以很好地保持大分子的生物活性,而且與親和素結合使用時具有多級放大作用,使其廣泛應用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究。
那么如何使用生wu素標記抗體或蛋白呢?下面遠慕給大家分享一下。
工具/原料
1. 10ul,50ul,200ul,1000ul可調高精度移液器
2. 恒溫箱(37℃)
3. 離心機(離心力可達到12,000×g)
4.生wu素標記試劑盒(Cata.No:EBLK0002, Elabscience)
實驗前準備
1.仔細閱讀使用說明書。
2.計算待使用NH2-Reactive Biotin的量。
3.提前20min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的NH2-Reactive Biotin繼續放置冰箱中)。
4.溶解NH2-Reactive Biotin:加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中,靜置10min,待其充分溶解,此時生wu物素的濃度為10mM。
操作步驟:(本操作步驟按照1mg的量進行標記)
1.取1mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的Labeling Buffer,使抗體的終濃度為2mg/ml,12,000 x g離心10min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5ml②待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次)
2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5ml,并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育30min。12,000 x g離心10min。
3. 加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5ml,并輕輕吹打混勻,12,000 x g離心10min。
4. 操作3重復一次。
5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中,6,000 x g離心10min。
6. 收集離心管中的溶液,即為生物wu素標記的抗體。