10*pbs緩沖液稀釋為1*Pbs:裂解細(xì)胞一般用1%的TritonX-100那樣的話5毫升的10倍的PBS+490毫升的蒸餾水。加水定容至1升,在1.034x10(5),高壓蒸汽滅菌20分鐘。室溫保存。一般用于實(shí)驗(yàn)室中的PBS緩沖液都是這樣配制,而不用摩爾分?jǐn)?shù)表示。
它具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜pH緩沖作用,蒸餾水不具有鹽平衡作用,可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性。生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用,對(duì)完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在最適條件下參與生物反應(yīng),所以使用PBS是shou選。
生化實(shí)驗(yàn)室
常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴bi妥酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。
pbs緩沖液的保存方法
加去離子水約800mL充分?jǐn)嚢枞芙猓缓蠹尤霛恹}酸調(diào)pH至7.4,最后定容到1L。高溫高壓滅菌后置于4攝氏度冰箱保存待用。
PBS緩沖液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L
PBS緩沖液一般作為溶劑,起溶解保護(hù)試劑的作用,具體試劑一般也有不同的比例配方,在針對(duì)性上就有了更好的效果。
1x PBS緩沖液就是0.01M的PBS,可直接使用,2x PBS就是2倍濃度,使用時(shí)稀釋一倍使用。0.1M的PBS一般不用來配置緩沖液,用于其它用處。