實(shí)驗(yàn)原理
血細(xì)胞中的過氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2,釋出新生態(tài)氧,使無色聯(lián)/苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)/苯胺,后者與亞硝基鐵qing化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒,沉著于細(xì)胞質(zhì)中。
實(shí)驗(yàn)方法
材料:
1.1%TMB
2.亞硝基鐵qing化鈉飽和溶液
3.1%過氧hua氫溶液
4.稀過氧hua氫溶液
5.瑞氏染色液
6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等
方法:
1.取0.1%TMB乙醇溶液lml,加亞硝基鐵qing化鈉飽和溶液10?l,溶液呈淡棕黃色。
2.在新鮮干燥的血片上,加混合溶液0.5ml,放置lmin后,再加稀過氧hua氫溶液0.7ml,染色6min。
3.自來水沖洗,待干,瑞氏染液復(fù)染15~20min。
4.自來水沖洗,待干,油鏡鏡檢。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。
(-)無顆粒沉著;
(±)顆粒細(xì)小,分布稀疏;
(+)顆粒較粗,局灶分布;
(++)顆粒粗大,分布較密,占胞質(zhì)1/2~2/3;
(+++)顆粒粗大,呈團(tuán)塊分布,幾乎布滿胞質(zhì);
(++++)全部胞質(zhì)均布滿顆粒,可覆蓋胞核。
注意事項(xiàng)
1.血涂片和骨髓片應(yīng)該新鮮制作,涂片應(yīng)該厚薄適宜;
2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果較好,勿用90%~95%乙醇,否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固,妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而導(dǎo)致染色效果差;
3.H2O2需新鮮配置,其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細(xì)胞看不見顆粒,紅細(xì)胞呈棕色或者綠色,即表示H2O2過濃。若H2O2加于玻片上無氣泡,則表示無效;
4.染色液pH為5.5;
5.試劑應(yīng)置于低溫暗處,防止應(yīng)光線照射而失效。