液體培養(yǎng)基接種是用接種環(huán)、移液器或吸管等工具,將菌體或菌液移至試管、三角瓶等容器中的液體培養(yǎng)基中的一種接種方法。其操作與前面斜面接種基本相同,但應(yīng)注意:液體培養(yǎng)基試管管口或三角瓶瓶口略向上以免培養(yǎng)液流出;加入菌體時,應(yīng)使接種環(huán)與管內(nèi)壁輕輕研磨,使菌體擦下,塞好棉塞后,將試管在手掌心中輕輕敲打或輕輕搖晃三角瓶,使菌體混合均勻。
試管液體接種
試管液體接種是將一定體積的樣品混懸液加入到盛有zhi定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi),或?qū)⒁欢w積、按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件下培養(yǎng)過的培養(yǎng)液接入盛有zhi定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)(有時是指接種環(huán)取一環(huán),或移液管移液器移取一定的體積,例如0.1ml、1ml等)。涉及試管液體接種的操作有MPN法檢測大腸菌群/大腸桿菌,以及沙門氏菌、單增李斯特氏菌的二次增菌轉(zhuǎn)接操作等。
此處以用移液器將一定體積的樣品混懸液接入到盛有zhi定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)為例,
①用酒精棉消毒操作臺面。將移液器吸頭盒放入酒精燈右側(cè),靠近酒精燈放置。將需要進行液體轉(zhuǎn)接的試管插在試管架上,置于酒精燈左邊左手附近。將移液器調(diào)至合適的刻度放于右手附近的架子上。廢物缸放于右手能觸及的范圍內(nèi)。
②點燃酒精燈,左手于酒精燈火焰附近打開移液器吸頭盒,右手持移液器用力插取吸頭兩下以防吸頭松動脫落,拔出移液器并蓋上移液器吸頭盒盒蓋。左手取待轉(zhuǎn)接液體試管,試管底部位于左手手心,移液器吸頭和試管口應(yīng)在酒精燈火焰周圍的無菌區(qū)域之內(nèi)。
③將試管伸向右手。右手食指,中指,無名指握住移液器,拇指靠在移液器按鈕上,小指和掌心下緣合圍夾住試管帽并用力拔出。如果操作者的手比較小,可以靠食指無名指和小指握住移液器,拇指仍靠在液體按鈕上。而中指向外伸,靠中指內(nèi)側(cè)和食指、無名指外側(cè)夾住試管帽。將試管口和移液器吸頭靠近火焰,試管口灼燒一周,在火焰附近將吸頭剛好伸入試管口,抵住試管內(nèi)壁下側(cè),同時按住移液器按鈕至一檔(輕微推不動)。不要將移液器吸頭伸到試管底部,而應(yīng)傾斜試管使液面傾斜至試管口附近并沒過吸頭jian端。右手拇指緩慢松開,使液體緩緩吸入洗頭,注意不要吸入空氣。如果有空氣吸入,必須將液體壓回試管重新吸取。當(dāng)右手拇指wan全松開時,撤離移液器,注意吸頭需盡量一直圍繞在在酒精燈火焰附近,并且吸頭務(wù)必保持向下姿勢以防止液體倒流入移液器內(nèi)部引起污染。
④吸完液體后,將移液器撤離試管,移液器吸頭移到酒精燈火焰的遠離操作者的一側(cè),將試管口在火焰上灼燒滅菌。
⑤滅菌后,右手小指迅速將試管帽蓋上,此時移液器吸頭仍然要在火焰形成的無菌區(qū)域內(nèi),不可離酒精燈火焰太遠。蓋上試管帽將試管歸位。
⑥左手取待轉(zhuǎn)接入液體的試管,右手保持移液器吸頭在酒精燈火焰附近。
⑦右手保持握移液器姿勢取下試管帽并灼燒管口。將吸頭抵靠在試管口的內(nèi)壁上,緩緩?fù)苿右埔浩靼粹o至底(wan全推至第二檔,使殘存在吸頭jian端的液體也流出)。推出液體時注意不要將吸頭深入試管底部,也不要用力推導(dǎo)致液體飛濺。
⑧左手將試管口靠近火焰滅菌,移液器吸頭移到酒精燈火焰的另一側(cè)。再次灼燒試管口
⑨右手保持握移液器姿勢將試管帽蓋上,將試管歸位。移取液體完畢后,按壓移液器滑動桿使吸頭脫落至廢物缸,移液器放回架子。熄滅酒精燈,將臺面消毒并收拾干凈。
三角瓶液體接種
相對于試管的液體接種培養(yǎng),三角瓶接種培養(yǎng)的優(yōu)勢在于通氣效果好。多見于霉菌或一些細(xì)菌的復(fù)壯培養(yǎng)或者搖床培養(yǎng)等。操作與前面提到的液體試管接種操作基本相同,最后將液體加入三角瓶的時候,三角瓶傾斜,移液器吸頭抵在三角瓶的內(nèi)壁,緩緩將液體加入,避免噴濺和氣泡