一、標準菌株的概念及其應用
1.1標準菌株概念
1)GB/T 27405-2008
實驗室質量控制規范食品微生物檢測:
①標準培養物:標準菌株、標準儲備菌株和工作菌株的統稱。
②標準菌株:至少定義至屬或種水平的菌株。按其特征進行分類和描述,有明確的來源。
③標準儲備菌株:標準菌株經過一代轉接后獲得的同種菌株。
④工作菌株:由標準儲備轉接后獲得的同種菌株。
1.2標準菌株的應用:
各種國際標準、國家標準、行業標準及企業標準等的相關微生物檢測,用于驗收培養基(包括試劑盒)、驗證方法和評估實驗操作。
二、微生物菌種管理的相關流程
2.1菌株的采集:
實驗室用菌種一是到國家法定機構采購,二是購買ATCC菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種來源,均統一采集。采集中嚴格按照規范執行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證菌種合格和環境安全。采集中要有菌種傳代標識。選擇有資質的標準菌株的合格供應商,每批標準菌株必須附帶有供應商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所采購的標準菌株是合格的。
2.2標準菌株和驗收
實驗室收到標準菌株,首先應進行符合性感官檢查,記錄菌株號和標準菌株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時還應記錄標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等情況。
2.3凍干標準菌株的復活
2..3.1開啟產品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,從凹口處撕開產品外包裝,撕掉標簽上的拉片,將其貼于菌株接收、保存記錄序號前面。
2.3.2復活:選擇合適的培養基和培養條件(根據生產商說明或有關技術通則見附錄)進行復活。菌種的首ci活化最好是在非選擇性瓊脂培養基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養基。凍干菌株的傳代次數不得超過5代,從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。
捏管帽處安瓿瓶(僅一次)使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之,使液體流入含小球的管底。通過擠捏壓碎小球使其與液體混合,立即將拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉拭子,接種于初級培養平板,接種圈的直徑約為25mm,用一無菌接種環在先前接種區域劃線10-20次,促使分離出單菌落。同時吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管,副溶血性弧菌接種3%氯化鈉菌胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管立即進行培養。細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍干菌株會在幾天后長出,但是少數菌會表現出延滯期延長的現象,需要將正常培養時間加倍。復活后的菌株為F1代。