培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈,稱取的份量務必準確。酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。
營養均衡:六大營養物缺一不可。部分生物還有特殊的要求;營養物質的配比;酸堿度。
培養基配制時的質量控制
容器:配制和分裝培養基的燒瓶,平皿或試管等器材應為中性,無酸,堿抑制物殘留,平皿底部要平,以免瓊脂厚薄不一,影響藥敏試驗結果。
成分來源:各種成分來源可靠,不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要o/f試驗),除加入葡萄糖外,不能含o/f試驗的假陽性。培養基配制用水應是蒸餾水。
pH值調整:根據培養基的不同要求調整pH 值,控制在要求范圍的±0.2之內。應當注意,培養基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1~0.2,故矯正時應比實pH值高0.1~0.2。
滅菌:根據培養基所含成分及配制數量的不同,選擇不同的滅菌方式,既要達到滅菌效果,又不破壞培養基成分。一般對穩定的培養基,如mh瓊脂、營養瓊脂可用高壓滅菌,即121℃15min ;而含糖的培養基則以108℃滅菌為好,以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等,可采用間隙滅菌法滅菌。
分裝:根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養基所用的平皿、試管要求清潔,不殘留酸堿;制備平板培養基時,操作臺要水平,以避免瓊脂平板厚薄不一,同時確保無菌操作。
培養基配制后的質量控制
培養基外觀情況:包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發現培養基表面有裂紋或與培養皿的邊緣分離,說明培養基有脫水現象,必須丟棄。
無菌試驗:每一批配好的培養基均須進行無菌試驗。先滅菌后分裝的培養基,可采用抽樣方法試驗,少于 100 個樣本通常選取 5%~10%的量,如果配制大量培養基,則任意選取 10 個培養基;無菌分裝培養基則需全部做無菌試驗。樣本在 35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養,如培養基含有血液,則需再置于室溫 1 天,以檢查嗜冷菌。選擇性培養基因含有抑制物質,能抑制許多微生物,因此,可加入 10 倍量的無菌液體培養基,稀釋抑制物質,以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗,接種時,也要檢查每個平板上的可見菌落。
性能測試:每一批新制或新購的培養基,使用前均須取已知性質的庫存菌種進行性能測試。培養基按目的不同可分為增菌培養基、分離培養基和鑒定培養基。
①增菌培養基:接種少量難以生長的細菌,在一定時間內觀察增菌情況,細菌能生長的最小接種濃度越小,說明增菌培養基性能愈好。
②分離培養基:要求目的菌生長良好,非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多,較好的方法是將測試菌調成 0.5 麥氏濁度的菌懸液,再用 0.001ml 的標準接種環涂劃在培養基上,觀察菌落生長。
③鑒定培養基:應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂,須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌 3 種菌分別接種 3 支培養基,若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性,斜面產堿/高層產酸,斜面產堿/高層產堿,質量才算合格。