如果說明書中有推薦的稀釋比例,請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響,推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗,從中發(fā)現(xiàn)最佳的稀釋比例。
如果說明書沒有推薦稀釋比例,僅注明“Use at an assay dependent dilution",就需要做大量的預實驗來摸索最佳的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實驗方法時常用的工作濃度,可以作為預實驗的參考。未純化的抗體一般在說明書中不會標明抗體的濃度,因為大部分全抗血清、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標明其中特異性抗體的濃度,實驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實驗稀釋比例。
請記住,下表中的各種稀釋比例和工作濃度僅僅是作為一個起始點,需要根據(jù)試驗結(jié)果來進行適當?shù)恼{(diào)整。最好以此起點作一系列的濃度,從中確定最佳的工作濃度和稀釋比例!
組織培養(yǎng)上清 | 腹水 | 全抗血清 | 純化抗體 | |
WB / dot blot | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IHC / ICC | neat - 1/10 | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 5 ug/ml |
EIA / ELISA | 1/1000 | 1/10000 | 1/5000 | 0.1 ug/ml |
FC | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IP | 1/100 | 1/50-1/100 | 1 - 10 ug/ml | |
Concentration estimate | 1 - 3 mg/ml | 5 - 10 mg/ml | 1 - 10 mg/ml |