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如何確定一抗的稀釋比例?
點擊次數(shù):568 更新時間:2023-01-11

如果說明書中有推薦的稀釋比例,請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響,推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗,從中發(fā)現(xiàn)最佳的稀釋比例。

如果說明書沒有推薦稀釋比例,僅注明“Use at an assay dependent dilution",就需要做大量的預實驗來摸索最佳的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實驗方法時常用的工作濃度,可以作為預實驗的參考。未純化的抗體一般在說明書中不會標明抗體的濃度,因為大部分全抗血清、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標明其中特異性抗體的濃度,實驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實驗稀釋比例。

請記住,下表中的各種稀釋比例和工作濃度僅僅是作為一個起始點,需要根據(jù)試驗結(jié)果來進行適當?shù)恼{(diào)整。最好以此起點作一系列的濃度,從中確定最佳的工作濃度和稀釋比例!


組織培養(yǎng)上清

腹水

全抗血清

純化抗體

WB / dot blot

1/100

1/1000

1/500

1 ug/ml

IHC / ICC

neat - 1/10

1/100

1/50 - 1/100

5 ug/ml

EIA / ELISA

1/1000

1/10000

1/5000

0.1 ug/ml

FC

1/100

1/1000

1/500

1 ug/ml

IP


1/100

1/50-1/100

1 - 10 ug/ml

Concentration estimate

1 - 3 mg/ml

5 - 10 mg/ml

1 - 10 mg/ml


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