抗體由于性質(zhì)和所使用的儲(chǔ)存條件等各有不同,其保質(zhì)期可能從幾周到幾年??贵w能否正確保存,直接決定了抗體的活性和使用效果。每個(gè)抗體有其*的保存蕞佳條件,但我們依然可以總結(jié)抗體保存的一般準(zhǔn)則以及一些注意事項(xiàng)。抗體必須存放在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值范圍。為了維持蛋白質(zhì)的活性,以及防止其聚集,經(jīng)常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質(zhì)里面。如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。
1. 抗體保存要點(diǎn)
(1)收到抗體后需先在 12000 rpm 離心 1-5 分鐘,再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存,如果抗體體積不足50 ul,可延長(zhǎng)離心時(shí)間至 5 分鐘,從而確??贵w全部離心下來(lái)。
(2)對(duì)于大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃,也可4℃短暫保存1-2周,并不影響抗體活性。
①對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說,保存在-20℃即可。如果抗體在2周內(nèi)會(huì)使用,推薦在4℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害。如果要長(zhǎng)期保存則*是在-20℃或-80℃。當(dāng)然蕞關(guān)鍵的是按照說明書的推薦來(lái)進(jìn)行保存。但是,腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長(zhǎng)期在4℃保存會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。
②分裝可以蕞大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,蕞少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,需將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來(lái)。
③抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃盡量不要超過1天。
④盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上。且避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。
(3)大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時(shí)間,所以是在4℃的條件下來(lái)完成的。4℃運(yùn)輸蕞主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程。所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸。
2. 抗體保存示例
(1)多克隆抗體
多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。即使沒有甘油,只要你*凍融,抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。此外,該抗體濃度應(yīng)高于1mg/ml,因?yàn)橄〉目贵w容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。
(2)單克隆抗體
單克隆抗體可以加入50%的甘油存放于-20℃。也可4℃或-20℃保存于飽和硫酸銨中。一般不會(huì)出現(xiàn)失活、細(xì)菌滋生以及氧化等現(xiàn)象。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體*是存放在-20℃。但凍干法需要昂貴的設(shè)備和勞動(dòng)力。
(3)帶標(biāo)記的抗體
帶標(biāo)記的抗體一般儲(chǔ)存在黑色容器中或者用錫箔紙包裹。
①酶標(biāo)記抗體
堿性磷酸酶和其他酶結(jié)合物對(duì)于冷凍特別敏感,一般應(yīng)在4°C短期存儲(chǔ)。標(biāo)記抗體長(zhǎng)期保存*是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。雖然某些酶結(jié)合物可在無(wú)保護(hù)劑的情況下于-20°C儲(chǔ)存,但必須分裝,以防止反復(fù)凍融。
②熒光標(biāo)記抗體
熒光遇光容易分解,熒光標(biāo)記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應(yīng)該存放在4°C,避免讓其凝固。
3. 抗體保存其它相關(guān)信息:
(1)甘油保存
有些科研工作者會(huì)向抗體中加入50%的甘油來(lái)避免反復(fù)凍融,甘油在-20℃會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果需要加入甘油來(lái)保存抗體的話,請(qǐng)注意無(wú)菌操作,避免污染。
(2)蛋白保護(hù)劑
蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來(lái)標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。
(3)關(guān)于疊氮/化鈉(sodium azide)的使用
為了防止微生物污染,疊氮/化鈉經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。但在下述情況中不能使用疊氮/化鈉:
①如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究:疊氮/化鈉在抵抗微生物的同時(shí),對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的, 因?yàn)樗钄嗔司€粒體的 cytochrome electron transportsystem。
②要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:疊氮/化鈉會(huì)干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將疊氮/化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮/化鈉保存,但是濃度只能是0.01%。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮/化鈉作為保護(hù)劑。
此外,如果需要去除疊氮/化鈉,可以通過凝膠電泳或過濾的方式,IgG 的分子量是 150kDa,疊氮/化鈉的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮/化鈉從抗體中去除。