黃酮類化合物的提取,主要是根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)和提取過程伴隨的雜質(zhì)是否容易除去來選擇適當(dāng)?shù)奶崛∪軇?/p>
黃酮苷類和極性較大的苷元,如羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查耳酮等,一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、水或極性較大的混合溶劑提取,其中用得多的是甲醇—水(1:1)或甲醇。多糖苷類則可用沸水提取,以破壞水解酶的活性,避免苷類水解,例如從槐花米中提取蘆丁。在提取花青素類化合物時(shí),可加入少量酸,如0.1%鹽酸,但提取一般黃酮苷類成分時(shí)不應(yīng)加酸,以避免發(fā)生水解。黃酮苷元的提取宜選用極性較小的溶劑,如氯-仿、乙-醚、乙酸乙酯等。對(duì)于極性小的多甲氧基黃酮苷元,也可用苯進(jìn)行提取。
對(duì)于得到的粗提取液,可進(jìn)一步回收溶劑濃縮成浸膏后,再用溶媒萃取、堿提酸沉淀、大孔吸附樹脂、超臨界流體萃取、超聲波等方法初步精制。
1.溶劑萃取法
利用黃酮類化合物與混入的雜質(zhì)極性不同,選擇不同的溶劑進(jìn)行萃取,不僅可以使黃酮類化合物與雜質(zhì)分離,還可以使苷類與苷元或極性苷元與非極性苷元相互分離。例如植物葉子的醇浸提液,用石-油醚萃取,可以除去葉綠素和胡蘿卜素等脂溶性色素;水提取液濃縮后加入3-4倍量的乙醇,可以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖等水溶性雜質(zhì)。
有時(shí)溶劑萃取過程也可以用逆流分配法連續(xù)進(jìn)行。常用的溶劑系統(tǒng)有:水—醋酸-乙酯、正丁-醇—石-油醚等。
2.堿提酸沉淀法
黃酮類化合物分子中大多數(shù)都含有酚羥基,顯弱酸性,易溶于堿性水而難溶于酸性水,因此可以用堿性水溶液(如飽和石灰水、5%碳酸鈉或稀氫氧-化鈉溶液等)或堿性稀醇來提取。提取液加酸酸化后,黃酮類化合物即可沉淀析出。
在用堿提酸沉法進(jìn)行提取純化時(shí),應(yīng)當(dāng)注意所用堿濃度不宜過高,以免在強(qiáng)堿條件下,尤其在加熱時(shí)破壞黃酮母核;在加酸酸化時(shí),酸性也不宜過強(qiáng),以免生成詳鹽,致使析出的黃酮類化合物又重新溶解,降低產(chǎn)品得率;當(dāng)原料中含有大量果膠、黏液質(zhì)等水溶性雜質(zhì)時(shí),如花、果實(shí)等原料,宜用石灰乳或石灰水代替其他堿性水溶液進(jìn)行提取,以使上述含羧基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀而不被溶出,更有利于黃酮類化合物的純化處理。
此法簡(jiǎn)便易行、經(jīng)濟(jì)安全,如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取均應(yīng)用此方法。從槐花米中提取蘆丁的操作過程為:槐花米加約6倍量水,煮沸,在攪拌下緩緩加入石灰乳至pH8~9。在此pH條件下微沸20—30min,趁熱抽濾;濾渣再加4倍水煎煮1次,趁熱抽濾。合并濾液在60-70℃下,用濃鹽酸調(diào)pH至5,攪勻,靜置24h,抽濾。沉淀物水洗至中性,60℃干燥得蘆丁粗品,并于水中重結(jié)晶,70-80℃干燥得蘆丁純品。