新生牛血清(Newborn Calf Serum)是來自剛出生~出生后2周內的新生牛靜脈取血。經大規模混合后除菌過濾制成成品,主要用于動物細胞培養,是醫藥生物技術產品的重要原材料之一,其質量好壞直接影響細胞生長情況。
總蛋白含量是新生牛血清需要檢查的指標。它屬于化學成分的初步分析。有人統計過國產新生牛血清的蛋白含量1,在比較各產區各年份后,發現其含量在3.7%~4.4%之間。進口新生牛血清并不與之*一致。因為國內的血清常采自奶牛,而國外的血清常采自肉牛。蛋白質是新生牛血清的主要成分,在細胞培養中起著維持滲透壓、pH 值緩沖、物質運輸和提供營養、促進細胞粘附等重要作用。在胎牛血清中,其總蛋白含量要更低。
血紅蛋白含量也是新生牛血清一項重要檢測指標。它是在血清運輸和加工過程中細胞裂解釋放到血清中的。之所以檢測主要是由于牛血清中血紅蛋白具有氧化性,其含量過高會引起羧基的產生和脂質過氧化反應,從而導致生產細胞受損,也會增加下游純化處理的難度,給藥品質量帶來安全隱患2。有報道血紅蛋白具有神經毒性。在腦皮層細胞的體外培養中,培養24小時后,血紅蛋白會造成神經元的廣泛死亡(EC50為1-2.5μM)3。在《中國藥典》三部(2015 版)中,要求對新生牛血清中血紅蛋白含量應不高于200 mg/L,方法主要為分光光度法。
使用時常見問題及解決方法:
一、保存血清-好的方法?
血清應保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
二、如何解凍血清才不會使產品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。
三、如何避免沉淀物的產生?
1.解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
2.解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生
3.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
四、血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。