微載體細胞培養法

1.微載體選擇：先用利用三種小量微載體做培養實驗，觀察細胞在一定時間內細胞的吸著率和計算細胞數，以得到zui大量細胞為佳。

2.水化：稱一定量的微載體放入容器中，按每克微載體加50～100ml的比例，加入無Ca2＋和Mg2＋的磷酸緩沖液（PBS），室溫下放置應不少于3小時，并不時輕微攪動，然后再用新鮮PBS洗一次。

3. 消毒：可采用高壓蒸汽消毒，也可在水化后用70％酒精浸泡消毒，再用無菌的PBS漂洗一二次。

4.傳代培養：在連續進行微載體培養時，可以不必把細胞從微載體分離下來，可將帶有細胞的微載體和新的微載體混合進行培養細胞能移動到新載體上。如果進行其它實驗或需要分離細胞進行傳代培養時，和常規培養相同，先用EDTA＋胰蛋白酶溶液作用使細胞脫離微載體表面。細胞脫離微載體后，可用自然沉降法，即在室溫下靜止5分鐘，微載體將先自沉在底部，細胞大部分仍在上清中，然后離心上清即可得到細胞。如果需要分離程度較高時，需用孔徑為100微米的尼龍網或不銹鋼網過濾后，再離心濾過液，就可得到較純凈的細胞。

生物試劑的使用常識：

（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強腐蝕性、等特性）。

（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不允許用同一種工具同時連續取用多種試劑。取完一種試劑后，應將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另一種試劑。

（3）試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請及時將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。

（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內（怕產生原試劑的再次污染）。