革蘭氏染色(Gram stain)是細菌學比較廣泛使用的鑒別染色方法,革蘭氏染色的主要步驟是:細菌先經堿性染料結晶紫染色,而后經dian液進行媒染,之后用酒精脫色,在一定條件下有的細菌媒染后的顏色不會脫去,有的可以被脫去。
前者叫做革蘭氏陽性菌,后者為革蘭氏陰性菌。為方便進一步觀察,脫色后再用堿性蕃紅進行復染,陽性菌仍為紫色,陰性菌染成紅色,這就是革蘭氏染色的原理。
其實還有一種方法,能更有效的鑒別與分析活細菌與死細菌,即遠慕生物推薦的活細菌染色試劑盒:MycoLight™ Flow Cytometric Live Bacteria Assay Kit流動流式細胞術活細菌檢測試劑盒以及MycoLight™ Live Bacteria Fluorescence Imaging Ki活細菌熒光成像試劑盒。
這款產品的作用原理是:MycoLight™520是一種非熒光酯酶底物,可擴散到革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中。在細菌細胞內非特異性酯酶水解后,產生綠色熒光產物并在細菌內積累。與常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比,該活細菌染色試劑盒可提供更明亮,更穩定的信號,背景更低,染色方案更容易。
《免疫熒光顯微鏡-Cat#22409》
用CFDA或MycoLight™活細菌熒光成像試劑盒染色的大腸桿菌的熒光圖像。CFDA在成像之前需要洗滌步驟以小化背景,而使用該試劑盒不需要洗滌(Cat#22409)。MycoLight™520的染色效率遠高于CFDA,因為更多的細菌顯示出綠色熒光。在染色1小時后,MycoLight™520的信號仍留在細胞中,而CFDA很容易漏出。在每個樣品中呈現相同量的細菌,并且在相同的暴露時間下拍攝熒光圖像。
?《流式細胞儀-Cat#22407》
使用ACEA NovoCyte流式細胞儀在FITC通道中分析大腸桿菌懸浮液的相對活力。讀數(計數(%))獲自各種活/死大腸桿菌混合物。通過兩個不同的峰可以容易地區分每種混合物中的活的和死的種群。